技術文章
人登革熱病毒 IgM(DFV IgM)操作流程
閱讀:1799 發(fā)布時間:2012-4-5 人登革熱病毒 IgM(DFV IgM)酶聯(lián)免疫分析
試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
96T
使用目的:
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中登革熱病毒 IgM(DFV IgM)表達。
人登革熱病毒 IgM(DFV IgM)實驗原理
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人登革熱病毒 IgM(DFV IgM)表達。用純化的抗原包
被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中登革熱病毒 IgM(DFV IgM)相結合,經(jīng)洗滌除去未結
合的抗原和其他成分后再與HRP 標記的抗原結合,形成抗原-抗體-酶標抗原復合物,經(jīng)過
*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化
成zui終的黃色。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),與CUTOFF 值相比較,從
而判定標本中人登革熱病毒 IgM(DFV IgM)的存在與否。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 陽性對照 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 陰性對照 0.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
人登革熱病毒 IgM(DFV IgM)標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1
孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)
2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不
觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒后棄去,如此
重復5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止
液后15 分鐘以內進行。
操作程序總結:
人登革熱病毒 IgM(DFV IgM)計算和結果判定:
試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品OD 值< 臨界值(CUT OFF)者為登革熱病毒 IgM(DFV IgM)陰性
陽性判定:樣品OD 值≥ 臨界值(CUT OFF)者為登革熱病毒 IgM(DFV IgM)陽性
。
人登革熱病毒 IgM(DFV IgM)注意事項
1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未
用完,板條應裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存。
6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為2M 的硫酸,使用時必須
注意安全。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 個月