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豬Ⅰ型膠原羧基端肽(ICTP)試劑盒操作步驟
閱讀:1910 發(fā)布時間:2011-12-27豬Ⅰ型膠原羧基端肽( ICTP)試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍: 96T
0.2µg/L -6µg/L
使用目的:
本試劑盒用于測定豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中Ⅰ型膠原羧基端肽( ICTP)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中豬Ⅰ型膠原羧基端肽( ICTP)水平。用純化的
豬Ⅰ型膠原羧基端肽( ICTP)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次
加入Ⅰ型膠原羧基端肽( ICTP) ,再與HRP 標(biāo)記的Ⅰ型膠原羧基端肽( ICTP)抗體結(jié)合,
形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催
化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的Ⅰ型膠原羧基
端肽( ICTP)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線
計算樣品中豬Ⅰ型膠原羧基端肽( ICTP)濃度。
試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 標(biāo)準(zhǔn)品(12µg/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8條 9 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
豬Ⅰ型膠原羧基端肽試劑盒操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
6µg/L 5 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3µg/L 4 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5µg/L 3 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.75µg/L 2 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.375µg/L 1 號標(biāo)準(zhǔn)品 150µl的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同) 、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。 在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl, 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,
然后再加待測樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50µl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色) 。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值) 。 測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進行。
豬Ⅰ型膠原羧基端肽試劑盒注意事項
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值) ,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5) 。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存: ;2-8℃。
2.有效期:6個月