徠卡熒光顯微鏡依據(jù)光路可分為透射式和落射式兩種，現(xiàn)今徠卡新型熒光顯微鏡多為落射式熒光顯微鏡，某些徠卡大型熒光顯微鏡中兼有透射利落射兩種方式的激發(fā)光路。①透射式熒光顯微鏡，激發(fā)光源是從標(biāo)本下方經(jīng)過聚光鏡穿過標(biāo)本材料來激發(fā)熒光，適于觀察對光可適的標(biāo)本。其優(yōu)點(diǎn)是低倍鏡時熒光強(qiáng)，而缺點(diǎn)是隨放大倍數(shù)增加其熒光減弱。②落射式徠卡熒光顯微鏡，是近代發(fā)展起來的新式熒光顯微鏡，其激發(fā)光源是從標(biāo)本上方經(jīng)過套在物鏡外用的特殊的垂直照明器，從物鏡周圍落射到標(biāo)本上，光路中需加上一個雙色束分離器，它與光軸呈45。角，激發(fā)光被反射到物鏡中，并聚集在樣品上，樣品所產(chǎn)生的熒光以及由差玻片表面等反射的激發(fā)光同時進(jìn)入物鏡，即用同一物鏡作為聚光器和收集熒光的物鏡。由于不必透過載坡片，減少了激發(fā)光的無效吸收，提高了對激發(fā)光的利用率。如換用不同的激發(fā)濾片／雙色束分離器／阻斷濾片的組合插塊，可滿足不同熒光反應(yīng)產(chǎn)物的需要。徠卡熒光顯微鏡的優(yōu)點(diǎn)是視野照明均勻，成像清晰，放大倍數(shù)愈大，熒光愈強(qiáng)。這里我們主要介紹落射式熒光顯檄鏡的構(gòu)造。

 

（一）光源

 

受檢標(biāo)本所能發(fā)出的熒光強(qiáng)度通常取決于激發(fā)光源的強(qiáng)度。由于熒光物質(zhì)的量子效規(guī)格，由啟動裝置校制，其使用壽命與啟動次數(shù)和工作時間密切相關(guān)o

 

（二）濾片系統(tǒng)

 

濾片的正確選擇是獲得良好熒光觀察效果的重要條件，包括激發(fā)濾片、阻斷濾片熱濾片和紫外線吸收濾片等。

 

1．激發(fā)濾片激發(fā)濾片裝在光源和標(biāo)本之間的濾片滑板中，其作用是吸收光源中波良較長的可見光，使短于一定波江的光波通過，作為徠卡熒光顯微鏡的激發(fā)光。各類徠卡熒光顯微鏡使用的激發(fā)濾片型號、名稱均不相同，但大都根據(jù)其光譜的基本色調(diào)命名，如W（紫外光）、B（藍(lán)色）、Dv（藍(lán)紫色）等，使用時應(yīng)根據(jù)觀察的熒光所需要的激發(fā)波長，選擇某一種濾片并推入光路。

 

2．阻斷濾片阻斷濾片又稱吸收濾X，是裝在物鏡和目鏡之間的光路滑板中，其作用是吸收視野內(nèi)末被標(biāo)本吸收的激發(fā)光，允許標(biāo)本內(nèi)物質(zhì)發(fā)射的熒光通過，以獲得清晰的熒光圖像和保護(hù)觀察吝的眼睛。阻斷濾片多采用數(shù)字作為標(biāo)志，吸收短于濾片標(biāo)記數(shù)字的波長光，允許長于標(biāo)記數(shù)字的波長光通過。在進(jìn)行熒光染色觀察時，激發(fā)濾片和阻斷濾片必須聯(lián)合應(yīng)用，要根據(jù)使用的熒光素有效吸收波長的不同，選用適當(dāng)?shù)臑V片，即激發(fā)濾片允許某種波長范圍的激發(fā)光通過，則相應(yīng)的使用能吸收和阻斷該波長范圍的阻斷濾片。

 

備注：徠卡熒光顯微鏡的主要組成組成部分由北京中儀光科科技發(fā)展有限公司編輯整理上傳。