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中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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普魯士藍(lán)染色液(核固紅法)操作說明

時(shí)間:2016-1-19閱讀:4733
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普魯士藍(lán)染色液(核固紅法)

產(chǎn)品簡介:

含鐵血黃素(Hemosiderin)是一種血紅蛋白源性色素,為金黃色或棕黃色顆粒,因其

含鐵,且為金黃色,故稱為含鐵血黃素。當(dāng)紅細(xì)胞被巨噬細(xì)胞吞噬后,在溶酶體酶的作用下,

血紅蛋白被分解為丌含鐵的橙色血質(zhì)和含鐵的含鐵血黃素。 Perls  普魯士藍(lán)反應(yīng)(Prussian

blue reaction)又稱為含鐵血黃素染色,即經(jīng)過亞鐵青化鉀和稀酸處理后可以產(chǎn)生藍(lán)色,常

見于吞噬細(xì)胞或間質(zhì)內(nèi),其染色原理在于亞鐵化鉀溶液使三價(jià)鐵離子從蛋白質(zhì)中被稀鹽酸

分離出來,三價(jià)鐵不亞鐵化鉀反應(yīng),生成一種丌溶解的藍(lán)色化合物即三價(jià)鐵的亞鐵青化物。

Leagene  普魯士藍(lán)染色用于顯示局部組織內(nèi)的各種出血性病變,常見于吞噬細(xì)胞內(nèi),

可以很好地區(qū)分含鐵血黃素不其他色素。該染色液穩(wěn)定性好、可以長期保存、丌易產(chǎn)生沉淀、

應(yīng)用范圍廣,可以進(jìn)行復(fù)染。該染色液的復(fù)染液采用核固紅,是zui經(jīng)典、zui常用的復(fù)染液。

產(chǎn)品組成:

名稱

2×50ml     2×100ml

試劑(A):

A1: Perls stain A

25ml

25ml

50ml

50ml

RT

RT

Perls stainB   A2: Perls stain  

臨用前,取 A1、A2 等量混合即為 Perls stain,丌宜提前配制。

試劑(B):  核固紅染色液

50ml

100ml

RT  避光

使用說明書

 份

自備材料:

1、固定液:10%中性福爾馬林、4%多聚甲醛等

2、系列乙醇

操作步驟(僅供參考)

()石蠟切片染色:

1、組織固定于 10%中性福爾馬林,常規(guī)脫水包埋。

2、切片厚度 4μm,常規(guī)脫蠟至水。

3、蒸餾水水洗 1min

4、切片入 Perls stain(見注意事項(xiàng) 2),浸染 1530min。

5、蒸餾水充分沖洗 25min。

6、入核固紅染色液,淡染細(xì)胞核 510min。

7、自來水沖洗 15s。

8、常規(guī)脫水透明,中性樹膠封固

()冰凍切片染色

1、無需脫蠟,直接迅速用蒸餾水沖洗 23min。

2、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟,時(shí)間可以相應(yīng)縮短。

()細(xì)胞染色

14%多聚甲醛固定 1020min。

2、自來水沖洗 次,每次 2min。

3、蒸餾水沖洗 次,每次 2min。

4、染色、脫蠟、透明、封固步驟同石蠟切片的染色步驟,時(shí)間可以相應(yīng)縮短。

染色結(jié)果:

含鐵血黃素或三價(jià)鐵

細(xì)胞核、其他組織

藍(lán)色

紅色

陰性對照(可選)

取相同切片脫蠟至水。入 5%草酸孵育 26h,經(jīng) Perls stain,其余步驟同上。結(jié)果為陰性。

注意事項(xiàng):

1、 切片脫蠟應(yīng)盡量干凈。組織固定常采用  10%中性福爾馬林,經(jīng)普通福爾馬林長期固定

后,組織會(huì)有損傷。避免使用酸性固定劑,鉻酸鹽處理也會(huì)妨礙鐵的保存。

2、 整個(gè)操作過程中容器要干凈,避免用金屬鐵制品,洗切片和容器時(shí)以蒸餾水為宜,因普

通水內(nèi)含鐵質(zhì)。Perls stain  染色時(shí),應(yīng)根據(jù)樣本情況調(diào)整著色時(shí)間。

3、 所有切片都應(yīng)使用同一個(gè)陽性對照切片,選擇適合的對照非常重要。尸檢肺組織是一個(gè)

很好的對照,包含相當(dāng)數(shù)量的鐵陽性巨噬細(xì)胞(心衰細(xì)胞)。

4、 冰凍切片和細(xì)胞染色,根據(jù)具體情況摸索實(shí)驗(yàn)條件。

有效期:  12  個(gè)月有效。

相關(guān)產(chǎn)品:

產(chǎn)品編號(hào)

DC0032

DM0007

TC1213

產(chǎn)品名稱

Masson三色染色液

瑞氏-姬姆薩復(fù)合染色液

總膽固醇(TC)檢測試劑盒  (COD-PAP單試劑比色法 )

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