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顯微鏡知識掃盲（3）----顯微鏡操作和使用
一、使用環(huán)境與工作習(xí)慣
（一） 使用環(huán)境
顯微鏡的工作場所應(yīng)當(dāng)清潔、干燥、無震動、無腐蝕性氣體存在。
（二） 工作習(xí)慣
1. 臺面和凳子的高度要適當(dāng)。
2. 鏡檢時，即便用單目顯微鏡，也須兩眼同時睜開。用左眼觀察。以便右眼繪圖或記 錄。左手用來旋轉(zhuǎn)微動手輪，右手用來旋轉(zhuǎn)移動器。如一只眼睜。一只眼閉，眼睛容易疲勞，無法久看。工作時間較長時，可兩眼輪流觀察。
二、使用前的準(zhǔn)備
（一） 光學(xué)系統(tǒng)的安裝
對新購或已經(jīng)卸掉光學(xué)系統(tǒng)的顯微鏡，使用前必須安裝光學(xué)系統(tǒng)。安裝時，為了防止 向下掉灰塵，應(yīng)按照先上后下的順序，即按照目鏡、物鏡、聚光鏡、反射鏡的順序來安裝。安裝物鏡時，應(yīng)先將鏡筒升高，使轉(zhuǎn)換器與載物臺之間保持一定的距離。然后，握住物鏡，把它放入轉(zhuǎn)換器的螺絲口處，先略向反時針方向旋轉(zhuǎn)，待物鏡配上絲紋后，在按順時針方向旋入，旋至中等程度松緊即可。安裝三個以上的物鏡時，應(yīng)根據(jù)物鏡的放大倍數(shù)，從小到大順時針安裝，轉(zhuǎn)換物鏡時，不要用手推著物鏡旋轉(zhuǎn)，那樣會使物鏡的光軸歪斜。用手捏著轉(zhuǎn)換器的轉(zhuǎn)動盤旋轉(zhuǎn)，或用手扶著與物鏡轉(zhuǎn)換器銜接處的滾花外圓旋轉(zhuǎn)。 目鏡和物鏡裝好后，再將聚光器插入載物臺的下面的聚光器支架內(nèi)。插入的高度應(yīng)使聚光器生至zui高時，聚光鏡上透鏡的端面稍低于載物臺的平面，以免載玻片與聚光器的鏡頭相碰。然后，將聚光器的固定螺絲旋緊。
對不是電光源的顯微鏡，zui后再把反射鏡插入聚光器下面的插孔內(nèi)。
（二） 校正光軸
校正光軸的意義在于使物鏡、目鏡、聚光鏡的主光軸和可變光欄的中心點重合在一條直線上。所以又叫做合軸調(diào)節(jié)或中心調(diào)節(jié)。如果光軸歪斜，會使象差增大，分辨率和清晰度都要下降。
檢查方法是將可變光欄開至zui大，把低倍物鏡旋入光軸，降低鏡筒，使物鏡與載物臺之間的距離小于該物鏡的工作距離（5 mm以下）。不放標(biāo)本，調(diào)節(jié)反射鏡的角度，使視場zui亮，或調(diào)節(jié)光源燈的亮度，使視場明暗合適。
然后，拔掉目鏡，直接從鏡筒中觀察。一邊把可變光欄慢慢縮小或打開數(shù)次，當(dāng)光欄關(guān)至zui小時，光欄的像（此時只有一點點）應(yīng)正好落在物鏡通光孔的中心。當(dāng)光欄開大到一定程度時，光欄孔的像應(yīng)正好與物鏡通光孔的黑圈相重合。若符合上述兩個條件，說明它們"合軸"。否則，就需要調(diào)整。
目鏡和物鏡都是固定的，無法進(jìn)行調(diào)整。合軸調(diào)節(jié)主要是調(diào)整聚光鏡的位置。有些顯微鏡設(shè)有光軸調(diào)節(jié)螺絲，其聚光器支架兩旁有兩個光軸校正螺絲，調(diào)節(jié)這兩個螺絲，即可合軸。另一種聚光器是由框架上三個相隔120°的螺絲支持住。其中一個裝有彈簧，可以伸縮。另外兩個螺絲，可以旋動。調(diào)整這兩個螺絲，便可合軸。
顯微鏡的光軸校正好后，如果沒有拆下聚光器或其它特殊原因，不必經(jīng)常校正。
（三） 準(zhǔn)備好標(biāo)本
準(zhǔn)備好高質(zhì)量的標(biāo)本備用
三、 反射鏡、聚光器的用法和對光方法
（一） 反射鏡的用法
一般都使用平面反射鏡，反射太陽的散射光。只有在光線不足或窗外有干擾時，才使用凹面反射鏡。
（二）聚光器的用法
1. 聚光器高度的調(diào)節(jié)
一般的聚光鏡，在平行光照射的情況下，其焦點落在它上端透鏡平面中心上方約1.25mm處。當(dāng)使用高倍或油鏡時，由于放大率大，鏡像亮度小，需要較強的照明。因此，應(yīng)把聚光器升至zui高，以便使聚光鏡的焦點正好落在標(biāo)本平面上。但在使用低倍鏡時，可將聚光器適當(dāng)下降。
2. 可變光欄的用法 可變光欄起兩個作用。一是控制射向標(biāo)本的光通量；二是改變聚 光器的數(shù)值孔徑。在這兩個作用中，后者是主要的。為了使物鏡的分辨率得到充分的利用，從原則上說，聚光器的數(shù)值孔徑應(yīng)與物鏡的相同。否則，分辨率或清晰度就要下降。
（三）對光方法
對電光源顯微鏡來說，使用時，只要將光調(diào)節(jié)在合適的亮度即行。不需要進(jìn)行對光。但對使用自然光的低檔顯微鏡來說，要想獲得良好的觀察效果，必須充分利用照明光線。因此，鏡檢之前應(yīng)先對光。對光時，將低倍鏡旋入光軸，聚光鏡適當(dāng)升高，可變光欄開至zui大。然后，從目鏡中觀察，同時轉(zhuǎn)動反射鏡，直至視場zui明亮、清晰為止。如果利用自然光，則盡量躲避窗框和窗外樹枝的干擾。
四、 物鏡的正確調(diào)焦
對光完成后，升高鏡筒，將標(biāo)本玻片夾在移動器上，并將欲檢查的部分移至載物臺通光孔的*，然后開始調(diào)焦。
無論作何種檢查，均應(yīng)從低倍鏡開始。調(diào)焦時，先用粗動手輪將鏡筒下降，使低倍鏡的前透鏡與蓋玻片之間的距離略縮小于該物鏡的工作距離（5mm以下）。為了避免物鏡壓在標(biāo)本玻片上，可從側(cè)面窺視。然后，一邊從目鏡中觀察視野，一邊利用粗動手輪將鏡筒徐徐上升，待初見物像后，改用微動手輪作精細(xì)調(diào)焦，直至物像zui清晰為止。低倍物鏡的視場大，有利于觀察標(biāo)本的全貌。也可利用移動器尋覓觀察的目標(biāo)，如有必要，可將尋得的目標(biāo)移至視場的中心，為高倍鏡觀察作好準(zhǔn)備。
從低倍鏡轉(zhuǎn)換為高倍鏡時，如果物鏡是顯微鏡的原配物鏡，所用的載玻片、蓋玻片有符合標(biāo)準(zhǔn)，一般都可以進(jìn)行"等高轉(zhuǎn)換"。即轉(zhuǎn)換后，只要稍微調(diào)節(jié)一下微調(diào)旋鈕，即可看到清晰的圖象。但油鏡不強求齊焦，先將鏡筒升高后再轉(zhuǎn)換，zui后按低倍鏡的調(diào)焦方法重新調(diào)焦。
使用油鏡的方法如下：先將鏡筒升高，取下標(biāo)本玻片，稍稍降低聚光器，并在聚光器的鏡頭上滴兩滴香柏油（油中不應(yīng)有氣泡。如有，可用小木簽除去），再將標(biāo)本蓋玻片放回原處，把聚光器升高，使載玻片的底面與香柏油接觸。這樣，就完成了聚光鏡的油浸。接著，在蓋玻片上滴上一滴香柏油。然后從側(cè)面窺視，利用粗調(diào)使鏡筒盡量下降，直至油鏡的前透鏡浸沒在香柏油中（但尚未接觸玻片），這樣，又完成了物鏡的油浸。然后，一邊從目鏡中觀察，一邊利用微動手輪將鏡筒緩緩上升（注意不要擰錯了方向，壓碎蓋玻片），直至視野中出現(xiàn)zui清晰的物像為止。
聚光鏡的油浸，還可以采用另一種滴油方法：即不直接把油滴在聚光器的鏡頭上，而是把載玻片翻過來，將油滴在載玻片的底面上，然后在翻過去，對準(zhǔn)放置于聚光器上面，再使聚光器上升。來完成聚光器的油浸。這種方法雖然不那么順手，但比較安全。有些人使用玻璃棒直接與聚光鏡接觸來涂抹香柏油，這種方法容易劃傷鏡片，不宜采用。
在使用油鏡時，允許在聚光鏡與標(biāo)本之間不加香柏油，即聚光鏡上仍以空氣為介質(zhì)，但這會犧牲物鏡的分辨率。
如果油鏡觀察后，有需要轉(zhuǎn)回高倍物鏡觀察，應(yīng)將蓋玻片上的油擦去，以免沾污高倍物鏡。但聚光器上的油可以不擦，只要把光欄適當(dāng)縮小一點即可。
油鏡使用完畢后，要及時將香柏油擦拭干凈。鏡頭上可先用干凈的擦鏡紙擦干凈即行。聚光鏡的擦拭方法與此相同。如標(biāo)本需要保存，玻片上的香柏油可用"拉紙法"擦拭干凈。即將擦鏡紙覆蓋在玻片上，在紙上滴上一滴二甲苯，趁濕將紙條平拖著往外拉，連續(xù)幾次即可擦干凈。
zui后指出：在整個調(diào)焦過程中（尤其是高倍物鏡和油鏡的調(diào)焦），每個動作都要緩慢進(jìn)行。否則，物像會一閃而過，找不到觀察目標(biāo)。