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每支移液器的液程通常都用純水和正向移液技術(shù)校準過。因此我們推薦使用正向移液技術(shù)移取水性溶液,如緩沖液,稀釋酸或堿。當移取不同于水的液體時,由于具有不同的液體特性,其移液量可能偏離所選的量
下面先介紹一下正向移液和反向移液技術(shù)的操作。
1.將按鈕壓至*停點。
2.將吸頭浸入液面下1cm處,緩慢釋放按鈕使其滑回原位。將吸頭從液體中移出,接觸容器邊緣除去多余的液體。
3.排液時,吸頭緊貼容器壁先輕按按鈕至*停點,略作停頓后,將按鈕按至第二停點(這個操作會將吸頭內(nèi)的液體*排盡),將吸頭從容器中沿容器壁移出。
4.松開按鈕至準備位置。
1.將按鈕壓至第二停點。
2.將吸頭浸入液面1cm處,緩慢釋放按鈕使其滑回原位。這將時液體充滿吸頭。將吸頭從液體中取出,接觸容器邊緣去掉多余液體。
3.放液到接收容器時平穩(wěn)地輕按按鈕至*停點。保持在這個位置。一些液體會殘留在吸頭中不能被放出。
4.殘留在吸頭內(nèi)的液體能夠被吹回原溶劑中或者同吸頭一起丟棄。
5.松開按鈕到準備位置。
選擇合適的移液器對于微量移液的性也很重要,Thermo Scientific F系列移液器的*吹出設(shè)計則滿足了微量移液對性的需求。低于50μl液程的Thermo F系列移液器均采用雙活塞設(shè)計,與其它普通移液器相比,其空氣吹出能力增大50%-60%,因此在小體積的液體吹出時會非常干凈*,大大提高了移液的性。
我們使用Thermo Scientific Finnpipette F2 1-10 μl移液器,配合Thermo Scientific Finntip Flex 10吸頭,同時分別使用正向移液和反向移液,移取1%牛血清白蛋白(BSA,Sigma A7030)進行移液性測試。
圖1 表明當使用反向移液技術(shù)時,移液量的變化比使用正向移液技術(shù)處于更狹窄的一個范圍。
圖2 表明使用兩種移液方式的不度。不度是估量移液的重復(fù)性的。反向移液技術(shù)可以使不度相對于正向移液技術(shù)降低50%。
這是因為,BSA溶液含有易被疏水移液器吸頭壁吸附的疏水成分。當使用正向移液技術(shù)時,每次移液后少量的液體易殘留在吸頭中。這種趨勢會增加吹出液體體積之間的偏差,因為當重復(fù)移液時吸頭中累積的殘余液體可能增加下一次移液的移液量。而反向移液技術(shù)中有額外的液體被吸入吸頭中,這些額外的液體作用似一個蓄水池它使連續(xù)移液的移液量均等。這個蓄水池也能阻止空氣在吹出液體的zui后從吸頭口進入,這樣可以降低液體起泡的可能性。這使反向移液技術(shù)在移取小液量液體時尤其有用。由此可見,選擇Thermo Scientific F2移液器,同時配合反向移液技術(shù),可較好的提高移取蛋白溶液的度和重復(fù)性。
來源:離心機
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