前    言

糖類分析的主要目的有兩類：即單糖、寡糖的組成和多糖的分子量及其發(fā)布。糖類物質(zhì)的分離主要通過HPLC在色譜柱中實(shí)現(xiàn)，日本昭和電工長(zhǎng)期致力于色譜柱研發(fā)生產(chǎn)，產(chǎn)品多種多樣，無論您的課題是涉及有機(jī)聚合物、蛋白質(zhì)及肽、糖類、有機(jī)酸、藥物或無機(jī)離子，您都可以找到一款合適的Shodex HPLC色譜柱。它性能優(yōu)異，主要體現(xiàn)在：；柱壽命長(zhǎng)；優(yōu)良的機(jī)械強(qiáng)度和化學(xué)穩(wěn)定性。有關(guān)糖類分析用色譜柱詳見以下各章節(jié)。

絕大多數(shù)的糖類物質(zhì)無紫外吸收，所以不能很好地使用UV檢測(cè)器測(cè)定。其檢測(cè)手段目前常見的主要有以下三種。

1．示差折光檢測(cè)器RI

RI是一種通用型檢測(cè)器，具有廣泛的使用范圍，它對(duì)沒有紫外吸收的物質(zhì)，如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等都能夠檢測(cè)。RI還適用于流動(dòng)相紫外吸收本底大，不適于紫外吸收檢測(cè)的體系。在凝膠色譜中RI是*的，尤其是對(duì)聚合物分子量分布的測(cè)定。利用GPC+RI+標(biāo)準(zhǔn)品，我們可以得到被測(cè)物質(zhì)的相對(duì)分子量。

德國(guó)珊貝克公司的SCH2000檢測(cè)器是一種新概念示差折光檢測(cè)器， 它使用微處理器，使得從溶液置換到基線穩(wěn)定核查能夠自動(dòng)進(jìn)行，穩(wěn)定快速。SCH2000與以往不同的液相色譜用示差折光檢測(cè)器相比，具有以下的特長(zhǎng)：

*的操作性：*的快速平衡功能，在30分鐘內(nèi)自動(dòng)平衡基線。檢測(cè)器配備彩色液晶顯示器， 易于分析人員一眼就看到操作狀態(tài)和基線傾向；自動(dòng)啟動(dòng)功能，使之可自動(dòng)進(jìn)行從參比池的溶液置換到基線穩(wěn)定性核查的復(fù)雜操作；用幫助功能，很容易確定和校對(duì)裝置。

出眾的穩(wěn)定性：通過溫度調(diào)節(jié)方式的*化，電源打開后穩(wěn)定化時(shí)間縮短，并可獲得出眾的基線穩(wěn)定性。

安全措施：檢測(cè)器配備泄漏感應(yīng)器，萬(wàn)一溶劑泄漏，泵可以自動(dòng)停止。

多種自動(dòng)功能：檢測(cè)器設(shè)有外部輸入輸出端子以及RS232C通道端口，把檢測(cè)器與各種液相色譜組合能實(shí)現(xiàn)高度自動(dòng)化。

由于快速自動(dòng)啟動(dòng)功能，達(dá)到穩(wěn)定時(shí)間被減半。檢測(cè)器穩(wěn)定可在彩色顯示器上自動(dòng)測(cè)定核查。

2.粘度檢測(cè)器

高聚物溶液中的[η]與分子量之間存在著以下定量關(guān)系：
3．光散射檢測(cè)器（LS）

光散射技術(shù)測(cè)定高聚物的重均分子量（按分子重量統(tǒng)計(jì)平均得到的分子量），是當(dāng)前應(yīng)用較為廣泛的一種方法。凝膠色譜分離－光散射檢測(cè)器的結(jié)合不但可以直接測(cè)量大分子的分子量及分布，還可以得到分子形狀、動(dòng)力學(xué)半徑、枝化度等信息。

美國(guó)PD公司的PD2000系列的光散射*與70年代的小角光散射和80年代的多角光散射不同。小角光散射是忽略角度，只進(jìn)行濃度外推。多角光散射是忽略濃度。PD的光散射利用得拜公式，用角度和濃度同時(shí)參與計(jì)算。PD2000家族的儀器提供溶液中的聚合物和生物高分子新的的數(shù)據(jù)——分子量、尺寸、形態(tài)和其他的特征參數(shù)。它具有以下優(yōu)點(diǎn)：①高靈敏度；②*的重復(fù)性；③高精度；④易于操作；⑤快速?gòu)膹?fù)以前的試驗(yàn)結(jié)果；⑥易于拆卸清洗；⑦長(zhǎng)期穩(wěn)定工作；⑧較小的池體積（10微升），與RI聯(lián)用引起峰加寬效應(yīng)??；⑨采用聚焦光路，可以將散射體積見到zui小，得到很高的信噪比。其適用范圍涉及：1）仿生學(xué)和醫(yī)藥；2）塑料和其他的聚合物；3）蛋白質(zhì)和多糖類；4）油漆和涂料；5）石油化學(xué)制品；6）潤(rùn)滑油；7）添加物 ；8）食品生產(chǎn)；9）環(huán)保等，政府，并且其他實(shí)驗(yàn)室。

分離測(cè)試技術(shù)

除了常見的HPLC分離模式之外，現(xiàn)在又新興起了場(chǎng)流分離色譜（FFF），也可以用來進(jìn)行多糖的分離。非對(duì)稱場(chǎng)流分離色譜（AF4）屬于FFF家族的一員，是一個(gè)新的、有效快速分離和準(zhǔn)確描述不同的粒子和大分子的方法。它zui早在幾年前在文獻(xiàn)上有報(bào)道，是一個(gè)新的與色譜類似的分離技術(shù)，分離范圍用來從103到1012道爾頓。

德國(guó)POSTNOVA公司HRFFF 10.000系列非對(duì)稱場(chǎng)流分離色譜是以非對(duì)稱場(chǎng)流分析原理為基礎(chǔ)來工作的，是一項(xiàng)用來分離和表征流體中粒子和大分子的新穎和有效率的分離方法，它是世界上zui早的全自動(dòng)化AF4系統(tǒng)。該系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)的配置包括不同的泵、檢測(cè)器、自動(dòng)進(jìn)樣器等。10.000系列系統(tǒng)能通過樣品分子尺寸大小的差異來實(shí)現(xiàn)分離并檢測(cè)分子量、Rg、Rh等。其應(yīng)用范圍包括生物技術(shù)、多糖、藥物、蛋白質(zhì)、抗體、環(huán)境科學(xué)、材料科學(xué)等。

HRFFF 10.000優(yōu)勢(shì)包括：

l      不使用固定相，分離迅速準(zhǔn)確

l      直接進(jìn)樣，沒有必要的樣品預(yù)處理步驟

l      適用于不同的分離條件水相和有機(jī)溶劑，分子量和尺寸測(cè)定范圍大且容易得到

l      快速分離復(fù)雜的聚合物、粒子和膠體體系

l      分離中小的作用力能保護(hù)樣品的生物活性

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通過分離模式進(jìn)行色譜柱的選擇

凝膠滲透色譜（GFC）柱主要使用來分析淀粉等糖類物質(zhì)。但是在分析小分子量范圍且彼此之間分子量相近的糖時(shí)，僅僅憑借GFC模式就達(dá)不到一個(gè)令人滿意的結(jié)果了。Shodex 糖類分析用色譜柱由配位交換、離子交換、離子排阻、正/反相和凝膠過濾等多種模式組成，這些色譜柱適合于分析不同種類的糖。

通過樣品種類選擇色譜柱樣品種類所選擇色譜柱
普通食品中大的糖類SC1011
包含有寡糖的食品SC1821,KS-802,KS-802+SC1011
奶制品（蔗糖、奶糖）SP0810
發(fā)酵產(chǎn)品中的糖類、有機(jī)酸、醇類物質(zhì)SH1011,1821
包含糖酸的樣品，如：糖醛酸SH1011,1821
木材、果肉中的糖類SP0810

色譜柱 Selection: by Elution Volume
在下表中給出了Shodex SUGAR系列色譜柱KS-802，SC1011，SP0810，SC1211和SZ5532保留體積范圍。

色譜柱的選擇：通過糖的自然狀態(tài)

如下表所示，我們可以根據(jù)糖類的自然狀態(tài)來選擇色譜柱，像單糖、雙糖、寡糖、多糖、糖醇、有機(jī)酸、食物纖維。根據(jù)分析條件選擇色譜柱
如下表所示，可以根據(jù)分析條件進(jìn)行色譜柱的選擇。

根據(jù)糖類化合物進(jìn)行色譜柱的選擇下表中根據(jù)糖類化合物進(jìn)行色譜住的選擇。 要分離的糖類色譜柱的選擇
單糖
Glu,FruSP0810,SC1011,SC1211,KS-801
Glc,Gal,FruSP0810,SC1011,SC1211
Glc,Gal,ManSP0810
Glc,Gal,AraSP0810,SC1011,SZ5532
Glc,Xyl,AraSP0810,SC1011,SZ5532
Glc,Fru,山梨醇SC1011,SC1211,SC1811,SZ5532
Glc,Gal,山梨醇,DucitolSP0810,SC1011
Glc,Gal,Man,山梨醇,Ducitol,甘露醇SP0810
Glc,Fru,Gly,EtOHSC1011,SC1211,KS-801
Glc,Fru+alcoholsSC1011,SH1011,SC1211
Glc,Fru+organic acidsSH1011,SH1821
二糖
Suc,LacSZ5532
Suc,MalSZ5532
Suc,Mal,LacSZ5532
Mal,Iso麥芽糖SZ5532
Lac,LactuloseSP0810,SC1011
Suc,Glc,FruSC1011,SC1211,KS-801,SZ5532
Suc,Lac,Glc,Gal,FruSZ5532
Mal,Glc,Fru,Gly,EtOHSC1011,SC1211,KS-801
Cel,Glc,Gal,Man,Xyl,AraSP0810
Mal,Glc,Fru,山梨醇SP0810,SC1011,SC1211,SZ5532
Mal,Glc,Fru+alcoholsSC1011,SC1211,SH1011
Mal,Glc,Fru+organic acidsSH1011,SH1821
Suc,Glc,Fru,山梨醇SP0810,SC1011,SC1211,SC1821
Mal,MaltitolSP0810,SC1011,SC1211,SZ5532
Suc,Lac,Mal,MaltitolSZ5532
Glc,Suc,ErythrytolSP0810,SC1011,KS-801
Mal,Glc,Fru,ErythrytolSP0810,SC1011
寡糖
Sta,Raf,Mal,Glc,Gal,AraSC1011,KS-801,SZ5532
G4,G3,Mal,GlcSC1011,KS-801,KS-802
Sta,Raf,Suc,GlcSC1011,KS-801,SZ5532
Raf,Suc,Glc,Fru,AraKS-801
MaltooligosaccharideSC1821,KS-802,SZ5532
Maltooligosaccharide+alcoholsSC1821,KS-802,SH1821
Maltooligosaccharide+organic acidsSH1821
Maltooligosaccharide+sugar alcoholsSC1821,SC1011,KS-802
糖醇
木糖醇,山梨醇SC1011,SC1211,SZ5532
Sobitol,甘露醇,木糖醇SP0810,SC1211,SZ5532
Sobitol,Dulcitol,木糖醇SP0810,SC1011,SZ5532
Maltitol,山梨醇SC1011,SC1211,SZ5532
Maltitol,Dulcitol,Arabitol,木糖醇,甘露醇,山梨醇SC1211

Ara: 樹膠醛糖 Cel: 細(xì)胞乙糖 Fru: 果糖 G3: 麥芽三糖 G4: 麥芽四糖 Gal: 半乳糖 Glc: 葡萄糖 Gly: 甘油（丙三醇） Lac: 乳糖 Mal: 麥芽糖 Man: 甘露糖 Raf: 棉籽糖 Sta: 水蘇（四）糖 Suc: 蔗糖 Xyl: 木糖（戊醛糖）