原料藥中的雜質(zhì)包括有機(jī)雜質(zhì)（工藝和藥物相關(guān)的）、無(wú)機(jī)雜質(zhì)和殘留溶劑。其中有機(jī)雜質(zhì)就是一般我們所指的有關(guān)物質(zhì)，是指在藥物生產(chǎn)過(guò)程/貯存中所引入/生成的起始物料、中間體、副產(chǎn)物、異構(gòu)體、降解物、催化劑等1；藥物制劑的有關(guān)物質(zhì)主要是指藥物自身的降解物以及藥物與輔料或包裝材料相容性產(chǎn)物等2。有關(guān)物質(zhì)可能會(huì)具有不確定的毒性，甚至潛在的致癌、致畸、致突變等性質(zhì)，因此需嚴(yán)格控制。

       國(guó)內(nèi)外藥典中很多品種有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法通過(guò)峰面積比較的方法來(lái)確定是否符合規(guī)定，這種方法忽略了供試品溶液和對(duì)照品溶液的實(shí)際濃度，是一種xian量檢測(cè)的方法。但這種xian量方法有相當(dāng)?shù)木窒扌裕阂皇呛雎粤藢?shí)際濃度會(huì)導(dǎo)致測(cè)定數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性降低，二是無(wú)法統(tǒng)計(jì)出有關(guān)物質(zhì)的穩(wěn)定性變化趨勢(shì)和樣品的批間差異。越來(lái)越明顯的趨勢(shì)表明，國(guó)外更多的品種正以定量的檢驗(yàn)方法來(lái)代替xian量的檢驗(yàn)方法，本文的目的就是以定量的方法來(lái)說(shuō)明有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)方法的建立、驗(yàn)證和檢驗(yàn)的要求。
由于藥物和有關(guān)物質(zhì)本身一般都是有機(jī)物，且具有相類似的化學(xué)結(jié)構(gòu)，因此具有專屬性（穩(wěn)定性指示性）和準(zhǔn)確性高的HPLC法就作為了有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)的方法。本文將針對(duì)HPLC法檢驗(yàn)有關(guān)物質(zhì)方法的建立、驗(yàn)證和檢驗(yàn)與大家作一個(gè)探討。

一、有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)方法的建立

       首先需要說(shuō)明的是，任何一種檢驗(yàn)方法都不可能是萬(wàn)能的，HPLC法也是一樣，一般有兩個(gè)大的缺陷：一是HPLC檢驗(yàn)的圖譜不是一個(gè)“全譜"，也就是說(shuō)一個(gè)HPLC方法并不會(huì)像TLC方法一樣把所有的雜質(zhì)都會(huì)同時(shí)檢驗(yàn)出來(lái)，尤其是國(guó)內(nèi)現(xiàn)在使用較多的恒流的色譜方法，極性相差較大的化合物很難在一個(gè)色譜條件下檢出；二是有一些雜質(zhì)在檢驗(yàn)條件下沒有響應(yīng)，例如一些化合物的原料/中間體/副產(chǎn)物沒有紫外吸收，使用紫外檢驗(yàn)器是無(wú)法檢驗(yàn)到的。因此在建立有關(guān)物質(zhì)的檢驗(yàn)方法時(shí)，往往需要針對(duì)不同的已知雜質(zhì)建立特定的檢驗(yàn)方法，作為有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)方法的補(bǔ)充，這個(gè)方法即可能是HPLC法，也可能是TLC法，甚至可能是紫外法或滴定法等等，需要說(shuō)明的是，對(duì)于此類雜質(zhì)在總雜質(zhì)計(jì)算中不應(yīng)被重復(fù)計(jì)算。
      有關(guān)物質(zhì)HPLC檢驗(yàn)方法在建立時(shí)需考慮到在該色譜條件下是否所有潛在的雜質(zhì)都能被檢出、各雜質(zhì)的響應(yīng)值是否合適、有關(guān)物質(zhì)與含量之間的質(zhì)量守衡（Mass Balance，即理論上含量降低多少有關(guān)物質(zhì)就應(yīng)該增加多少）。
很多人在有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)方法建立時(shí)參考的是含量測(cè)定的方法甚至是血藥濃度測(cè)定的方法，往往這是不合適的，因?yàn)檫@些方法都是針對(duì)主成分的測(cè)定方法，它不會(huì)去考慮雜質(zhì)的檢出情況和準(zhǔn)確性，只需要不干擾主成分的測(cè)定即可，而且往往在含量測(cè)定的濃度下雜質(zhì)不能夠檢出，因此無(wú)論是流動(dòng)相的組成還是檢驗(yàn)波長(zhǎng)，可能都不適合有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。
      由于制劑有關(guān)物質(zhì)的檢驗(yàn)重點(diǎn)是降解物和相容性產(chǎn)物，因此原料藥生產(chǎn)工藝雜質(zhì)（包括原料、中間體、副產(chǎn)物等），如果不是降解物的話，都不是制劑有關(guān)物質(zhì)重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容，在制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中甚至可以不訂入2。因此制劑有關(guān)物質(zhì)的檢驗(yàn)方法很可能與原料藥會(huì)有所不同，這時(shí)需對(duì)原料藥中可能存在的工藝雜質(zhì)進(jìn)行重新定位，這也是方法建立和專屬性驗(yàn)證的一部分。
有關(guān)物質(zhì)HPLC檢驗(yàn)方法的建立主要有四個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)：色譜柱的選擇、流動(dòng)相的組成、檢驗(yàn)條件的選擇、雜質(zhì)測(cè)定的方法。下面我將從這四點(diǎn)出發(fā)說(shuō)明有關(guān)物質(zhì)是如何建立的。

1、色譜柱的選擇
       根據(jù)主成分和雜質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)，選擇合適的色譜柱，使其能夠盡可能在一個(gè)色譜條件下檢驗(yàn)所有雜質(zhì)。在選擇時(shí)往往極性強(qiáng)化合物選擇極性色譜柱、極性弱的化合物選擇非極性色譜柱，但由于成本和環(huán)保的原因，除極性非常強(qiáng)的化合物外（例如糖），一般我們選擇非極性色譜柱（例如C18）。
       即使相同類型的色譜柱，由于品牌、規(guī)格、型號(hào)等差異，色譜柱的保留行為可能會(huì)有很大差異，因此在檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)盡可能固定這些參數(shù)。

2、流動(dòng)相的組成
       流動(dòng)相的組成往往取決于色譜柱的選擇，在色譜柱選定后，通過(guò)調(diào)節(jié)流動(dòng)相中各組分的比例、pH值、緩沖鹽（包括離子對(duì)）的種類/濃度等條件，使主成分和雜質(zhì)能夠分離并在一個(gè)條件下檢驗(yàn)，必要時(shí)應(yīng)使用梯度。
緩沖鹽，特別是離子對(duì)試劑，各廠家的質(zhì)量差別比較大，因此在使用時(shí)應(yīng)盡可能使用固定的可靠的品牌。

3、檢驗(yàn)條件的選擇
      選擇合適的檢驗(yàn)器是有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)的一個(gè)重點(diǎn)，各種類型的檢驗(yàn)器都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)。例如紫外檢驗(yàn)器的優(yōu)點(diǎn)是成本低、適用性廣、操作簡(jiǎn)單，缺點(diǎn)是紫檢驗(yàn)器為非質(zhì)量型，各雜質(zhì)和主成分的響應(yīng)值可能會(huì)差別非常大；而蒸發(fā)光散射檢驗(yàn)器的優(yōu)點(diǎn)為它是質(zhì)量型檢驗(yàn)器，各雜質(zhì)與主成分的響應(yīng)值比較接近，缺點(diǎn)是價(jià)格比較高、非揮發(fā)性流動(dòng)相不能使用、檢驗(yàn)結(jié)果非線性。
       作為紫外檢驗(yàn)器，有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)波長(zhǎng)的選擇非常關(guān)鍵，這一方面決定了是否所有潛在雜質(zhì)能夠檢出，同時(shí)也決定了檢驗(yàn)時(shí)是否可以采用主成分對(duì)照的方法測(cè)定（本文中所說(shuō)的對(duì)照既可指主成分對(duì)照品，也可指主成分自身對(duì)照）。
4、雜質(zhì)測(cè)定的方法
       通常只有校正因子在0.9～1.1時(shí)才可以使用主成分對(duì)照的方法（國(guó)外由于有關(guān)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)制定得比較嚴(yán)格，所以校正因子在0.8～1.2時(shí)仍可以使用主成分對(duì)照的方法），校正因子超過(guò)此范圍的雜質(zhì)應(yīng)選擇外標(biāo)法或校正因子的方法測(cè)定。
       校正因子一般是通過(guò)同時(shí)進(jìn)行雜質(zhì)和主成分的線性測(cè)定（線性濃度范圍通常是從報(bào)告閾值或定量限到雜質(zhì)限度或?qū)φ諠舛鹊?20%～150%），再用主成分的斜率除以雜質(zhì)的斜率而得出，在計(jì)算時(shí)將雜質(zhì)峰面積與校正因子相乘即可。校正因子的概念與EP中的概念相同，與USP中的相對(duì)響應(yīng)因子互為倒數(shù)，因此在使用中一定要注意。

二、有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證
       根據(jù)對(duì)藥典的理解，相當(dāng)大多數(shù)的研發(fā)人員和檢驗(yàn)人員認(rèn)為有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)方法應(yīng)該是一個(gè)xian量檢驗(yàn)方法，驗(yàn)證可以按照xian量的方法進(jìn)行。但這種理解是不合適的，我從以下幾個(gè)方面來(lái)論述有關(guān)物質(zhì)（起碼是限度超過(guò)報(bào)告閾值的有關(guān)物質(zhì)）應(yīng)按定量方式進(jìn)行驗(yàn)證和檢驗(yàn)的：

A、對(duì)于外標(biāo)的檢驗(yàn)方法例如含量，樣品稱量要求“精密稱定"，以代入濃度進(jìn)行計(jì)算；xian量法只需要“稱取"一定范圍內(nèi)的樣品即可，因?yàn)榉Q量結(jié)果并不代入計(jì)算，也就是說(shuō)樣品的稱量范圍控制在較小的范圍內(nèi)（不是百分之十），只要在范圍內(nèi)，實(shí)際稱量值已不影響檢測(cè)結(jié)果。在有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)中，往往要求供試品和對(duì)照品稱量“精密稱定"。
B、從趨勢(shì)分析的角度來(lái)說(shuō)，采用xian量法無(wú)法對(duì)穩(wěn)定性結(jié)果和年度質(zhì)量回顧進(jìn)行雜質(zhì)的趨勢(shì)統(tǒng)計(jì)和分析。
C、ICH Q3A和Q3B兩部分均有描述，定量限不得高于報(bào)告閾值，即需要報(bào)告的雜質(zhì)具備定量的條件。
D、ICH Q3A和Q3B兩部分對(duì)于雜質(zhì)的描述，對(duì)于數(shù)據(jù)的報(bào)告，均采用數(shù)據(jù)的方式，應(yīng)為定量計(jì)算而得出的。
E、USP3等國(guó)外藥典中要求未知雜質(zhì)的限度為不得過(guò)0.1%，ICH Q3A和Q3B也要求超過(guò)鑒定閾值（一般為0.10%）的雜質(zhì)必須鑒定，檢驗(yàn)時(shí)必須采取先修約后判定，這是xian量法所不需要的。

F、USP4和EP5附錄中對(duì)于有關(guān)物質(zhì)的積分、計(jì)算和報(bào)告，也說(shuō)明了其檢驗(yàn)方法應(yīng)為定量的。

       綜上所述，有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)宜采用定量測(cè)定的方法，對(duì)應(yīng)的方案驗(yàn)證也應(yīng)采用定量的方法（限度低于報(bào)告閾值的雜質(zhì)可采用xian量測(cè)定/驗(yàn)證），即需要進(jìn)行專屬性、準(zhǔn)確性、精密度、定量限、線性/范圍、耐受性等幾方面的驗(yàn)證6，同時(shí)需進(jìn)行系統(tǒng)適用性的考查。

下面我從驗(yàn)證的幾大模塊分別闡述有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證要求。

1、專屬性
       專屬性主要的要求就是溶劑、主成分和輔料等對(duì)雜質(zhì)檢驗(yàn)沒有干擾。
       對(duì)于溶劑干擾主要為在溶劑峰位置與潛在雜質(zhì)峰是否重疊，以及溶劑峰是否影響雜質(zhì)峰的正常積分。
      對(duì)于主成分干擾，需要考查已知雜質(zhì)和強(qiáng)制降解峰是否與主峰重疊，一般需要采用二極管陣列檢驗(yàn)器證明主成分峰的純度。除了峰純度外，在強(qiáng)制降解試驗(yàn)中，需要考查質(zhì)量平衡，即在主成分含量降低約10%～20%情況下，含量降低值與有關(guān)物質(zhì)絕對(duì)增加值的偏差不超過(guò)5%，否則說(shuō)明有關(guān)物質(zhì)的檢驗(yàn)方法不適用，有些雜質(zhì)未檢出，或者有些雜質(zhì)的校正因子不準(zhǔn)確。
      對(duì)于輔料干擾，需要考查已知雜質(zhì)/降解物峰與輔料峰能夠識(shí)別并充分分離，以確保雜質(zhì)能夠*、準(zhǔn)確的檢驗(yàn)。這里需要說(shuō)明的是，“把輔料峰算成雜質(zhì)峰也是合格的"這種理論是*不對(duì)的，輔料峰是不能被計(jì)入雜質(zhì)峰的，因?yàn)殡s質(zhì)是被要求準(zhǔn)確、定量的。
       對(duì)于原輔料有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)，必要時(shí)應(yīng)使用成品有關(guān)物質(zhì)的檢驗(yàn)方法進(jìn)行中間體粗品的考查，以確定中間體的雜質(zhì)在主成分中殘留的情況。

2、準(zhǔn)確性
      由于有關(guān)物質(zhì)相對(duì)濃度較低，因此對(duì)于準(zhǔn)確性要求也并不像含量測(cè)定要求那樣高，但也有其特殊性，即回收率計(jì)算方法應(yīng)與檢驗(yàn)方法一致。也就是說(shuō)，如果檢驗(yàn)方法規(guī)定為外標(biāo)法，則回收率計(jì)算時(shí)應(yīng)采用外標(biāo)法；如果檢驗(yàn)方法規(guī)定為校正因子法，則回收率計(jì)算時(shí)應(yīng)采用校正因子法；如果檢驗(yàn)方法規(guī)定為主成分對(duì)照法，則回收率計(jì)算時(shí)應(yīng)采用主成分對(duì)照法。否則一概采用外標(biāo)法計(jì)算是沒有任何意義的！
      有關(guān)物質(zhì)準(zhǔn)確性驗(yàn)證一般采用加樣回收法，分別驗(yàn)證報(bào)告閾值、限度值和限度值120%～150%三個(gè)濃度水平下的回收率。在試驗(yàn)時(shí)，分別配制相應(yīng)的對(duì)照溶液、供試品溶液和三個(gè)雜質(zhì)濃度水平的加標(biāo)供試品溶液，計(jì)算時(shí)分別測(cè)定供試品加標(biāo)前后特定雜質(zhì)的量，扣除供試品中含有的雜質(zhì)的量，計(jì)算回收率。
      一般在報(bào)告閾值水平，回收率可接受標(biāo)準(zhǔn)為80%～120%；0.5%～1.0%含量水平的雜質(zhì)，回收率可接受標(biāo)準(zhǔn)為95.0%～105.0%。

3、精密度
       由于供試品中的雜質(zhì)種類、數(shù)目和含量，與工藝和批間差異有很大影響，因此對(duì)于超過(guò)報(bào)告閾值的雜質(zhì)，精密度驗(yàn)證可以通過(guò)配制多份平行樣品進(jìn)行測(cè)定；而對(duì)于供試品中不含/含量低于報(bào)告閾值的雜質(zhì)，可以通過(guò)計(jì)算不同濃度水平回收率的RSD來(lái)得出。
       精密度驗(yàn)證時(shí)，測(cè)定方法同樣應(yīng)按照規(guī)定的方法進(jìn)行。

4、定量限和檢出限
       按照ICH Q2的要求，定量限和檢驗(yàn)限一般有三種測(cè)定方法，但在實(shí)際HPLC方法中應(yīng)用多的是信噪比法，即定量限為信噪比10:1、檢驗(yàn)限為信噪比2～3:1時(shí)被測(cè)物的進(jìn)樣量。但在實(shí)際中往往這種測(cè)定方式是沒有意義的，因?yàn)樾旁氡葲Q定于被測(cè)物的峰高和噪音的波動(dòng)大小，不同的儀器、峰保留時(shí)間、儀器狀態(tài)、流動(dòng)相配制、甚至室溫，都可能會(huì)嚴(yán)重影響信噪比的測(cè)定結(jié)果，甚至可能是不同數(shù)量級(jí)的差別7，因此定量限/檢驗(yàn)限不應(yīng)只在驗(yàn)證時(shí)進(jìn)行，在檢驗(yàn)中同樣也需要進(jìn)行確認(rèn)，并作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的一部分，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
      如果說(shuō)這種定量限/檢驗(yàn)限的驗(yàn)證方法不適合，那么怎么樣去進(jìn)行定量限的驗(yàn)證呢？根據(jù)ICH Q3A和Q3B的要求，定量限不得高于報(bào)告閾值，因此我們通常按照?qǐng)?bào)告閾值相對(duì)濃度配制成相應(yīng)的對(duì)照品溶液，在進(jìn)樣檢驗(yàn)，要求其信噪比不得低于10:1（對(duì)于xian量檢驗(yàn)，要求按照限度值配制的對(duì)照品溶液的信噪比不得低于3:1）。這種溶液同樣在有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)中也應(yīng)當(dāng)考查，如果信噪比沒有通過(guò)，則系統(tǒng)適用性試驗(yàn)沒有通過(guò)，需要通過(guò)更換流動(dòng)相/色譜柱/色譜儀等方法來(lái)解決。
       定量限及以上的雜質(zhì)可以定量檢驗(yàn)，因此定量限驗(yàn)證除需滿足信噪比的要求外，還應(yīng)滿足重復(fù)性的要求，一般連續(xù)進(jìn)樣六針，其峰面積的RSD不得過(guò)10%。

5、線性/范圍
       一般至少五個(gè)點(diǎn)，從定量限到限度值的120%～150%，上限不宜過(guò)高，否則線性斜率會(huì)發(fā)生漂移，相關(guān)系數(shù)至少為0.99，面積歸一化法至少為0.999。如果定量限和限度值150%回收率通過(guò)，可不必考查Y軸截距與斜率的比值。

6、耐受性

有關(guān)物質(zhì)一般不宜做較大范圍的變化，尤其是梯度的方法，可重點(diǎn)關(guān)注相同規(guī)格不同品牌的色譜柱之間的耐受性，其他例如流動(dòng)相比例±2%、pH±0.1、柱溫±5℃也需要關(guān)注。
      在耐受性試驗(yàn)中需要考查不同條件下主要雜質(zhì)的數(shù)目、相對(duì)保留時(shí)間和檢驗(yàn)結(jié)果是否可以接受，也要考查系統(tǒng)適用性試驗(yàn)是否能夠通過(guò)。
      溶液穩(wěn)定性也可以作為耐受性的一部分，這里既需要考查供試品溶液的穩(wěn)定性，也需要考查對(duì)照溶液的穩(wěn)定性。溶液穩(wěn)定性是檢驗(yàn)結(jié)果是否有效的基本依據(jù)，也會(huì)實(shí)驗(yàn)室調(diào)查提供了可能。對(duì)于有光敏感的樣品必要時(shí)也應(yīng)考查光穩(wěn)定性。

7、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)是色譜檢驗(yàn)的基本要求，如果沒有通過(guò)表明系統(tǒng)沒有能夠達(dá)到檢驗(yàn)的要求，所產(chǎn)生的數(shù)據(jù)也是無(wú)效的。
      有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)中常見的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)一般為重復(fù)性和分離度考查。重復(fù)性一般是通過(guò)連續(xù)進(jìn)樣對(duì)照溶液/系統(tǒng)適用性溶液（一般為五針或六針），計(jì)算峰面積的RSD得出的，一般0.1%雜質(zhì)溶液的RSD不得過(guò)10%、0.5%～1.0%雜質(zhì)溶液的RSD不得過(guò)5.0%、1.0%以上雜質(zhì)溶液的RSD不得過(guò)2.0%；由于國(guó)外對(duì)雜質(zhì)研究得比較細(xì)，往往分離度測(cè)定是通過(guò)配制專門含有特定雜質(zhì)的對(duì)照品溶液/系統(tǒng)適用性溶液/分離度溶液，再進(jìn)樣檢驗(yàn)完成的，而國(guó)內(nèi)由于對(duì)雜質(zhì)研究比較粗，往往是通過(guò)觀察供試品溶液的圖譜來(lái)完成的。

      好的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，除分離度和重復(fù)性檢測(cè)外，還包括每次的定量限溶液測(cè)定，即配制的定量限溶液的信噪比應(yīng)不低于10:1。
三、有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)方法的檢驗(yàn)
通過(guò)以上內(nèi)容，可以得出結(jié)論：有關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)宜定量檢驗(yàn)。因此在檢驗(yàn)中需要注意以下幾個(gè)方法的內(nèi)容：
1、系統(tǒng)適用性要求
同以上驗(yàn)證部分的相關(guān)要求。
2、小峰面積的設(shè)定
在一些藥典或標(biāo)準(zhǔn)中有這樣的描述：“小于對(duì)照品溶液主峰面積0.5倍的忽略不計(jì)"，這實(shí)際上是指雜質(zhì)的報(bào)告閾值，而并不能當(dāng)作小峰面積。因?yàn)殡s質(zhì)檢測(cè)是定量測(cè)定的，檢測(cè)結(jié)果是通過(guò)計(jì)算后再修約得到的，如果按照此峰面積設(shè)置小峰面積，則有一部分峰面積略小于設(shè)定值的雜質(zhì)不會(huì)被積出，進(jìn)而造成漏檢，例如小峰面積設(shè)定為100，則峰面積為99的雜質(zhì)不會(huì)被積出，但二者的計(jì)算結(jié)果可能都是0.05%。那么是不是小峰面積設(shè)置得越小甚至是0才好呢？也不是，這樣會(huì)造成非常小的峰甚至小于檢測(cè)限的峰也被積出，影響結(jié)果的計(jì)算。參考EP和新的USP對(duì)于色譜法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)的要求，小峰面積一般設(shè)置為不超過(guò)報(bào)告閾值的一半4,5，但在結(jié)果的報(bào)告中，只有超過(guò)報(bào)告閾值的雜質(zhì)才被報(bào)告和計(jì)入總雜質(zhì)。這也是同一份樣品在不同實(shí)驗(yàn)室中的檢測(cè)結(jié)果可能存在巨大差別的重要原因。
而對(duì)于有雜質(zhì)采用校正因子法測(cè)定的方法時(shí)，也應(yīng)適當(dāng)設(shè)置降低小峰面積，以保證略小于報(bào)告閾值的雜質(zhì)能夠得以正常積分、計(jì)算、修約甚至報(bào)告。
3、與主峰不能*分離雜質(zhì)的積分

在很多檢驗(yàn)中會(huì)有主峰與雜質(zhì)峰不能*分離的情況，這時(shí)積分就非常重要了，一般系統(tǒng)默認(rèn)的方法都是將相鄰峰沿谷底進(jìn)行垂直分割，這樣會(huì)造成雜質(zhì)峰內(nèi)含有大量的主成分在里面，這時(shí)應(yīng)采用谷-谷積分（或者采用切線積分）4,5的方式進(jìn)行積分，以保證雜質(zhì)峰內(nèi)不包含主成分，而由于主萬(wàn)分濃度遠(yuǎn)大于雜質(zhì)，因此也可以確保積分后剩余的三角形中不包含雜質(zhì)（切線積分下面沒有三角形，三角形面積均計(jì)入主成分），進(jìn)而計(jì)算出準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。
      但需要注意的是，兩個(gè)雜質(zhì)峰沒有*分離的話是不能采用谷-谷積分的，否則下面的三角形面積將被漏檢，這時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況決定采用垂直積分或者切線積分的方式。

4、有關(guān)物質(zhì)單個(gè)雜質(zhì)的計(jì)算
      采用自身對(duì)照法比較簡(jiǎn)單，直接用供試品溶液雜質(zhì)峰面積除以對(duì)照溶液主峰面積，再除以對(duì)照溶液的稀釋倍數(shù)即可；而對(duì)于采用外標(biāo)法或主成分對(duì)照品法時(shí)，需要分別計(jì)算對(duì)照品溶液的濃度和供試品溶液的理論濃度，其中供試品溶液理論濃度的應(yīng)考慮供試品的含量，尤其對(duì)于不穩(wěn)定的制劑產(chǎn)品。
      為便于申報(bào)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)、穩(wěn)定性和趨勢(shì)分析的要求，一般可以將有關(guān)物質(zhì)計(jì)算的結(jié)果進(jìn)行修約（用于放行檢驗(yàn)的可以按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的小數(shù)點(diǎn)位數(shù)進(jìn)行修約）：對(duì)于原輔料結(jié)果小于1的應(yīng)保留至2位小數(shù)，對(duì)于結(jié)果大于1的應(yīng)保留至1位小數(shù)1；對(duì)于制劑產(chǎn)品結(jié)果小于1的應(yīng)保留至與報(bào)告閾值相同的小數(shù)點(diǎn)位數(shù)，結(jié)果大于1的應(yīng)保留至1位小數(shù)2。
       將修約之后的結(jié)果與報(bào)告閾值進(jìn)行比較，如果結(jié)果大于報(bào)告閾值，應(yīng)報(bào)告實(shí)際修約結(jié)果；如果小于報(bào)告閾值，則可以報(bào)告“小于***（報(bào)告閾值/定量限的數(shù)值）"。對(duì)于一些特定雜質(zhì)，峰面積小到未被積分時(shí)，可以報(bào)告“小于***（檢測(cè)限的數(shù)值）"/“未檢出（檢出限為***）"。

5、有關(guān)物質(zhì)總雜質(zhì)的計(jì)算

 有關(guān)物質(zhì)總雜質(zhì)不應(yīng)該采用總峰面積，按照單個(gè)雜質(zhì)的計(jì)算公式進(jìn)行計(jì)算，因?yàn)檫@樣會(huì)將小于報(bào)告閾值的雜質(zhì)也同時(shí)計(jì)算在內(nèi)，造成結(jié)果的不準(zhǔn)確。總雜質(zhì)在計(jì)算時(shí)，應(yīng)將所有規(guī)定內(nèi)的各超過(guò)報(bào)告閾值的雜質(zhì)相加得出。

6、有關(guān)物質(zhì)的統(tǒng)計(jì)

       有關(guān)物質(zhì)在檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)盡可能地保證使用相同品牌、填料和規(guī)格的色譜柱，甚至相同品牌的儀器和試劑，以保證各雜質(zhì)峰位置的一致性。在有關(guān)物質(zhì)報(bào)告時(shí)，應(yīng)同時(shí)報(bào)告各雜質(zhì)的相對(duì)保留時(shí)間，一般相對(duì)保留時(shí)間2.0以內(nèi)的雜質(zhì)可以確定至小數(shù)點(diǎn)后一位，2.0以上的雜質(zhì)會(huì)由于系統(tǒng)的漂移規(guī)定一定的范圍。在穩(wěn)定性和年度質(zhì)量回顧時(shí)對(duì)于有關(guān)物質(zhì)的統(tǒng)計(jì)應(yīng)基于相對(duì)保留時(shí)間分別對(duì)單一雜質(zhì)和總雜質(zhì)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。