一、使用在線(xiàn)過(guò)濾器

我深信在線(xiàn)過(guò)濾器是HPLC或UHPLC儀器上有經(jīng)濟(jì)效益的部件。在線(xiàn)過(guò)濾器放置在自動(dòng)進(jìn)樣器和色譜柱（或是保護(hù)柱）之間，常用的在線(xiàn)過(guò)濾器分為含有可替換篩板（0.5 μm或0.2 μm）的不銹鋼在線(xiàn)過(guò)濾器以及一次性的PEEK材質(zhì)的在線(xiàn)過(guò)濾器，一般必須選擇比柱篩板孔徑更小的篩板，這樣才能有效攔截可能堵塞色譜柱篩板的顆粒。一旦發(fā)現(xiàn)儀器的壓力開(kāi)始增加，可能在線(xiàn)過(guò)濾器篩板開(kāi)始堵塞了，我們必須在其被*堵塞前更新。

在線(xiàn)過(guò)濾器的功能就如同使用濾膜一樣，但是不需要任何額外的工作。使用離心機(jī)處理樣品后，還是有可能會(huì)有少許的顆粒進(jìn)入儀器，而位在色譜柱前面的在線(xiàn)濾器就可以將殘留顆粒攔截下來(lái)。此外在線(xiàn)濾器的好處是簡(jiǎn)單易換，一般只需要5分鐘就可以換好，就可以重新開(kāi)機(jī)使用，也不需要花時(shí)間重新調(diào)節(jié)或是校正。另外一個(gè)好處就是在線(xiàn)過(guò)濾器也可以過(guò)濾掉儀器中一些零配件老化耗損所產(chǎn)生的顆粒。我是非常的主張每臺(tái)液相儀器都裝配在線(xiàn)過(guò)濾器，即使使用保護(hù)柱，我也建議在保護(hù)柱前加裝在線(xiàn)過(guò)濾器。

二、使用保護(hù)柱

保護(hù)柱可以簡(jiǎn)單的說(shuō)是裝在色譜柱前面的一支短的色譜柱。一般是1-2 cm長(zhǎng)，裝的填料和使用的色譜柱填料相匹配，而使用的篩板孔徑不會(huì)比色譜柱中使用的篩板孔徑大。保護(hù)柱有兩種功能：（1）可以阻擋可能堵塞色譜柱的顆粒；（2）因?yàn)楸Ｗo(hù)柱和色譜柱填料相匹配，任何可能和色譜柱填料產(chǎn)生不可逆作用而不出峰的化學(xué)雜質(zhì)，會(huì)被保護(hù)柱先行捕獲。

使用保護(hù)柱絕對(duì)可以延長(zhǎng)色譜柱的壽命。但是考慮是否使用保護(hù)柱前，建議評(píng)估以下幾點(diǎn)：

（1）保護(hù)柱也不便宜，所以要考慮購(gòu)買(mǎi)保護(hù)柱的費(fèi)用是否能由所增加的色譜柱壽命補(bǔ)償回來(lái)；

（2）保護(hù)柱的壽命有多長(zhǎng)？必須注意何時(shí)需要換保護(hù)柱芯，不要因?yàn)楦鼡Q太晚而污染到色譜柱；

（3）如何沖洗保護(hù)柱？沖洗時(shí)需要將保護(hù)柱和色譜柱分開(kāi)沖洗，以免將累積在保護(hù)柱內(nèi)的不純物沖洗到色譜柱中；

（4）不要期望因?yàn)榧恿?-2 cm的保護(hù)柱而會(huì)增加柱效。裝上保護(hù)柱雖然類(lèi)似增加柱長(zhǎng)，但是使用保護(hù)柱也增加了兩個(gè)接頭和連接管路，這些會(huì)造成儀器系統(tǒng)柱效減少，因此如果能維持不裝保護(hù)柱時(shí)的柱效就不錯(cuò)了。

毋庸贅言，使用保護(hù)柱肯定可以延長(zhǎng)色譜柱的壽命，但是建議每個(gè)實(shí)驗(yàn)室在經(jīng)濟(jì)效益和工作量方面來(lái)評(píng)估是否需要使用保護(hù)柱。即使使用保護(hù)柱，我也會(huì)建議在保護(hù)柱和自動(dòng)進(jìn)樣器之間裝個(gè)在線(xiàn)濾器，畢竟更換在線(xiàn)濾器比更換保護(hù)柱便宜，也可以同時(shí)增加保護(hù)柱和色譜柱的壽命。

三、不進(jìn)未處理的樣品

不管有沒(méi)有使用前處理，建議所有的樣品在進(jìn)樣前經(jīng)過(guò)過(guò)濾或是離心處理。例如當(dāng)樣品經(jīng)過(guò)濾膜可以濾除顆粒從而減少堵塞色譜柱的篩板，濾膜的孔隙大小必須小于色譜柱的篩板孔徑大小。一般大于3 μm顆粒的色譜柱使用2 μm大小的篩板，3 μm顆粒的色譜柱則使用0.5 μm的篩板，而小于3 μm顆粒的色譜柱一般使用0.2 μm的篩板，因此通用的0.45 μm的濾膜基本可以用在除了亞2 μm顆粒以外所有的色譜柱；對(duì)于亞2 μm顆粒的色譜柱，一般使用0.2 μm大小孔隙的濾膜。大多濾膜是事先封裝好，可以直接接在注射器進(jìn)行過(guò)濾或是作為96孔板的過(guò)濾板。