| 一、細(xì)胞基本屬性 | ||||
| 細(xì)胞名稱 | HCT-8人回盲腸癌細(xì)胞（STR鑒定正確） | |||
| 細(xì)胞別稱 | HCT-8; HCT8 | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 年齡性別 | 男；67歲 | |||
| 組織來源 | 結(jié)腸；回盲腸結(jié)直腸腺癌 | |||
| 生長特性 | 貼壁生長 | |||
| 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 | |||
| 背景簡介 | HCT-8 [HRT-18]細(xì)胞與HRT-18細(xì)胞是一樣的；角蛋白免疫過氧化物酶染色陽性。 | |||
| STR位點(diǎn) | Amelogenin：X；CSF1PO：12；D13S317：8，11；D16S539：12，13；D18S51：11，17；D19S433：14，16；D21S11：29，32.2；D2S1338：17，25；D3S1358：17；D5S818：13；D7S820：10，11.3；D8S1179：15；FGA：22；TH01：7，9.3；TPOX：8，11；vWA：18，19； | |||
| STR鑒定位點(diǎn)圖 |  | |||
| 細(xì)胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
| 生物安全等級 | 1 | |||
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1x106cells/T25或1mL凍存管 | |||
| 支原體檢測 | 無 | |||
| 保藏機(jī)構(gòu) | ECACC; 90032006；中國典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫 | |||
| 培養(yǎng)基 | 90%RPMI- 1640+10% FBS+PS | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存 | |||
| 致瘤性 | Yes, in nude mice(Tumors developed within 21 days at 99% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^8 cells). | |||
| 基因表達(dá)情況 | carcinoembryonic antigen (CEA) 0.5 ng/10^6 cells/10 days; alkaline phosphatase. The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining. | |||
| 染色體 | 81~90 | |||
| 供應(yīng)限制 | 于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 細(xì)胞貨期 | 現(xiàn)貨，1周左右 | |||
| 運(yùn)輸方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用） 順豐快遞 | |||
| 供應(yīng)限制 | 于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
| 二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
| 收貨處理 | 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | 收到細(xì)胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇 | ||
| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | 第三天換液并檢查細(xì)胞密度 | ||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿 | 一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
| 傳代方法 | a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。 b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min（視細(xì)胞消化情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | 將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第三天換液并檢查細(xì)胞密度。 | ||
| 注意事項(xiàng) | 1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。 | 1.收貨時(shí)若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存； 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞。 | ||
| 到貨須知 | 1.收到細(xì)胞后，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。 2.靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照），記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。 3.由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。 | |||
| 備注：客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話： 按 2，我們隨時(shí)給予解答。 | ||||
| 三、細(xì)胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存 | |||
| 細(xì)胞密度 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 | |||
| 凍存方法 | a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。 b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
| 注意事項(xiàng) | 凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案 | |||
| 四、售后服務(wù) | ||||
| 重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)； 2.收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)； 3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)； 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)； 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時(shí)并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)； 6.細(xì)胞活性問題，請?jiān)谑盏疆a(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)； 7.視具體情況而定。 | |||
| 不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)； 2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)； 5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)； 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的，不重發(fā)； 7.視具體情況而定。 | |||
| 五、參考文獻(xiàn) | ||||
| ATF3 inhibits the growth and stem cells-like features of SW620 colorectal cancer cells in vitro. Journal of Men's Health. 2021. 17(4);287-294. 作者：Chuanqian Huang, Changdan Chen, Fangjing Zheng, Xiaoxiao Ni, Jianfang Lin, Wenjuan Wu, Xiaolan Lai. 細(xì)胞：The human colon cell line NCM460 and the CRC cell lines SW620, SW480, HT29, HCT8, and HCT116. 2022年影響因子/JCR分區(qū)：0.789/Q4 GPC2 deficiency inhibits cell growth and metastasis in colon adenocarcinoma. Open Med (Wars). 2022 Feb 14;17(1):304-316. doi: 10.1515/med-2022-0421. PMID: 35233466; PMCID: PMC8847712. MicroRNA-323a-3p Negatively Regulates NEK6 in Colon Adenocarcinoma Cells. J Oncol. 2022 Jan 19;2022:7007718. doi: 10.1155/2022/7007718. PMID: 35096064; PMCID: PMC8791743. Prognostic role of oxytocin receptor in colon adenocarcinoma. Open Med (Wars). 2021 Nov 22;16(1):1762-1776. doi: 10.1515/med-2021-0387. PMID: 34877409; PMCID: PMC8610102. 作者：Lumin Lin、 Yanbin He、 Zhuona Ni、 Min Zhang、 Jie Liu、 Qianqian Mao、 Bin Huang、 Jiumao Lin 細(xì)胞：HCT-8、HCT-116 2023年影響因子/JCR分區(qū)：2.1/Q3 | ||||
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