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如何利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期
首先我們這邊先來(lái)看下這樣的問(wèn)題：新消化獲得的細(xì)胞直接染色立馬上機(jī)檢測(cè)，這一步是不是必須的？RnaseA的作用包不包括去處胞內(nèi)的雙鏈RNA？是的話，RnaseA能直接穿膜嗎？不是的話，胞內(nèi)的雙鏈RNA不管了？陰參的設(shè)定是不是健康成人外周血的淋巴細(xì)胞就可以了？
根據(jù)這樣的染色方法而定，原理都是先打孔再染色，因?yàn)镻I沒(méi)有穿膜作用。所以不同就在打孔的方法上?，F(xiàn)在基本有兩種方法，一種就是乙醇固定。70-75%濃度效果都差不多，優(yōu)點(diǎn)是作用比較輕柔，可長(zhǎng)時(shí)間固定，一般一個(gè)月都沒(méi)問(wèn)題，更長(zhǎng)時(shí)間我沒(méi)試過(guò)。適用于不能預(yù)計(jì)上機(jī)時(shí)間的朋友，可以先固定好幾批細(xì)胞然后再一起染色上機(jī)。缺點(diǎn)就是打孔時(shí)間較長(zhǎng)，至少過(guò)夜才能保證打孔效果。
根據(jù)這樣的染色方法而定，原理都是先打孔再染色，因?yàn)镻I沒(méi)有穿膜作用。所以不同就在打孔的方法上?，F(xiàn)在基本有兩種方法，一種就是乙醇固定。70-75%濃度效果都差不多，優(yōu)點(diǎn)是作用比較輕柔，可長(zhǎng)時(shí)間固定，一般一個(gè)月都沒(méi)問(wèn)題，更長(zhǎng)時(shí)間我沒(méi)試過(guò)。適用于不能預(yù)計(jì)上機(jī)時(shí)間的朋友，可以先固定好幾批細(xì)胞然后再一起染色上機(jī)。缺點(diǎn)就是打孔時(shí)間較長(zhǎng)，至少過(guò)夜才能保證打孔效果。
另一種就是用Triton打孔，這種方法比較激烈。優(yōu)點(diǎn)是速度快，消化以后可以馬上打孔染色上機(jī)，而且不使膜蛋白變性，不容易造成粘連。缺點(diǎn)就是不能長(zhǎng)時(shí)間保存樣品，一般好半個(gè)小時(shí)內(nèi)檢測(cè)，不然時(shí)間越久細(xì)胞DNA含量的離散度越高，圖像越難看。不過(guò)現(xiàn)在很多廠家的試劑盒都是用這種快速打孔的方式。
膜通透性改變以后酶可以進(jìn)去。