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超實(shí)用干貨（三） | 液相色譜柱使用壽命常見提問與解決方法
液相色譜柱是高效液相色譜（HPLC）系統(tǒng)中的關(guān)鍵組成部分，其使用壽命直接影響分析的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。以下是一些關(guān)于液相色譜柱使用壽命的常見問答：
100針之后就峰型畸變，塔板數(shù)非常低，不能繼續(xù)使用，這個(gè)壽命確實(shí)很短。在正常情況下，液相色譜柱的使用時(shí)間會(huì)更長一些。這類壽命短有以下兩種情況：
（1）以前用于相同檢測的色譜柱壽命比現(xiàn)在這個(gè)色譜柱的壽命長。此種情況下，可以探究一下該實(shí)驗(yàn)是否所有條件真的都保持不變。
① 樣品組成是否已改變？因?yàn)槿绻麡悠分行乱肓藦?qiáng)吸附的污染物就會(huì)破壞色譜柱的性能。
② 儀器流體路徑上的密封件是否狀況良好？因?yàn)槊撀涿芊馑樾紩?huì)堵塞柱入口的篩板和填料，從而導(dǎo)致柱壓升高，色譜柱性能被損壞。
（2）用于此樣品檢測的所有色譜柱的壽命均這么短。實(shí)驗(yàn)人員可以確定色譜條件沒有變化。
① 色譜柱填充床的機(jī)械弱點(diǎn)。這可能是由于在實(shí)驗(yàn)室里對柱子的存放不得當(dāng)導(dǎo)致的，比如摔打過或者碰撞過？這種問題一般只有在使用之后才能顯示出來。
② 色譜條件不科學(xué)。可能是色譜條件中的流動(dòng)相對色譜柱填料不友好，需要優(yōu)化色譜條件或者重新篩選色譜柱。比如流動(dòng)相水相比例＞90%，這需要選擇可以耐受純水相的鍵合相的色譜柱；比如流動(dòng)相的pH≤2，這需要用耐酸的鍵合相的色譜柱；比如流動(dòng)相的pH≥10，則需要用耐堿的鍵合相的色譜柱。
我同意您的觀點(diǎn)。我們需要做的是找到造成色譜柱壽命短的原因，然后看看，我們能做些什么優(yōu)化措施。
造成壽命短問題最可能的原因是色譜柱的入口端樣品成分的吸附。它們可能因?yàn)樵诹鲃?dòng)相中的低溶解度而沉淀，也可能被強(qiáng)吸附。當(dāng)你注入的樣品越來越多時(shí)，這些污染物會(huì)堆積在色譜柱入口端，這樣就阻礙了樣品的正常吸附和分布，就導(dǎo)致了峰型畸變。這個(gè)問題通常也會(huì)伴隨著色譜柱背壓的增加。有以下幾種方法可以防止這種情況的發(fā)生：
（1）優(yōu)化樣品的前處理步驟。
采用SPE固相萃取小柱等具有類似化學(xué)性質(zhì)的樣品前處理耗材處理樣品來優(yōu)化。
（2）更有效的方法是使用保護(hù)柱。
分析色譜柱的入口端作為最易損壞的部分，在分析色譜柱的前端加裝一根保護(hù)柱來代替分析柱入口端被損壞，通過這樣的方式來延長分析色譜柱的使用壽命。為了使分析柱獲得最佳性能，您需要使用一個(gè)與分析柱填料和粒徑相同的保護(hù)柱。如果使用的保護(hù)柱的粒徑更大，會(huì)導(dǎo)致色譜峰型展寬以及分離度變差。
確實(shí)還有其他的解決方法，但它們都存在一些缺點(diǎn)。
（1）可以用溶劑來“清洗"色譜柱，這些溶劑應(yīng)該可以溶解色譜柱入口端的污染物。但是在許多情況下，這個(gè)過程根本不起作用 。
例如，如果污染物是沉淀在色譜柱入口端的密封圈碎屑，根本不可能溶解它們。此外，每次洗滌也會(huì)讓鍵合相有水解的風(fēng)險(xiǎn)，因此重復(fù)的洗滌實(shí)際上會(huì)導(dǎo)致色譜柱的加速老化。并且，在洗滌之后，你必須用流動(dòng)相重新平衡你的色譜柱，這也是相當(dāng)耗時(shí)的。
（2）還有一種經(jīng)常嘗試的方法是反向“再生"色譜柱。它需要用不同的溶劑切換沖洗色譜柱，需要很多時(shí)間，直到污染物被去除，或者它可能根本除去不了污染物。