實(shí)驗(yàn)線蟲分離器

一、產(chǎn)品介紹

本款實(shí)驗(yàn)線蟲分離器由玻璃漏斗、橡皮管、止水夾組成，適用于各植保站、森防站、獸醫(yī)站、衛(wèi)生防疫站以及高等院校和科研院所與線蟲研究有關(guān)的科室。

二、產(chǎn)品參數(shù)

1、玻璃漏斗

直徑：12cm，高度：30cm

2、橡皮管

直徑：1cm，長度：40cm

3、止水夾

長5。5cm，寬6。5cm

三、使用方法

1、貝爾曼漏斗法：

將玻璃漏斗（直徑為10–15 cm）置漏斗架上,下面接一段（10 cm左右）橡皮管,橡皮管上裝一個止水夾。取濕重10g劈成“火柴桿"狀大小的分離材料,用兩層紗布包好,放入漏斗中,然后放入清水,清水以浸沒分離材料為度。經(jīng)過4–24小時(shí),由于趨水性和本身的重量,線蟲離開植物組織,并在水中游動,最后沉降到漏斗底部的橡皮管中。打開止水夾,取底部約5–15ml的水樣,其中含有樣本中大部分活動的線蟲。在解剖鏡下檢查,如果線蟲的數(shù)量少,可以離心（1500 r/min,2–3 min）沉降后再檢查。

2、常規(guī)鏡檢：

分別將各標(biāo)號盛有線蟲分離液的培養(yǎng)皿置于解剖鏡下觀察,先確認(rèn)有無線蟲。對有線蟲的樣品進(jìn)行活體鏡檢,觀察它的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)。然后選擇幾條成熟、特征易觀察的線蟲,用針或吸管移至載玻片上的水滴中。將此載玻片在酒精燈火焰上方往返幾次（5–6 s）或放置于已盛滿高溫?zé)崴?、打開蓋子的保溫瓶口上,蒸30–60 s至蟲體死亡,加蓋玻片后在顯微鏡下觀察。根據(jù)形態(tài)特征予以初步鑒別,以確定是否需作進(jìn)一步的鑒定。

3、快速鏡檢：

（1）用顯微鏡直接觀察線蟲濃縮分離液。分離液經(jīng)一定時(shí)間后,當(dāng)漏斗下端和乳膠管內(nèi)出現(xiàn)透明度降低甚至混濁現(xiàn)象、表明線蟲的游離量較多時(shí),即可用培養(yǎng)皿接取混濁狀分離液3–5滴,直接置于解剖鏡下觀察；如有線蟲,就將盛有分離液滴的培養(yǎng)皿,放置于已盛滿高溫?zé)崴?、打開蓋子的保溫瓶口上,進(jìn)行30–60 s的熱殺處理,擦干培養(yǎng)皿底部凝結(jié)的小水珠,直接放置于顯微鏡下（先用低倍物鏡,找到目標(biāo)線蟲,再轉(zhuǎn)換到高倍物鏡）觀察形態(tài)特征予以鑒別。

（2）用顯微鏡直接觀察線蟲分離液。用培養(yǎng)皿盛放貝爾曼漏斗放出的線蟲懸液適量,直接移放在光學(xué)顯微鏡下觀察,用低倍鏡調(diào)整焦距,找到線蟲,一手移動培養(yǎng)皿,不斷變換所觀察線蟲的位置,一手不斷調(diào)整焦距。在10倍的接物鏡下松材線蟲的基本形態(tài)鑒定特征如頭部、中食道球、陰門、交合刺、尾形等都可以清晰地觀察到。發(fā)現(xiàn)分離液中存有松材線蟲時(shí),挑取線蟲并制成臨時(shí)玻片標(biāo)本進(jìn)一步觀察。

四、形態(tài)鑒定：

依據(jù)雌雄成蟲的形態(tài),主要是雌成蟲的形態(tài)進(jìn)行鑒定。但分離到的線蟲沒有成蟲或極少時(shí),需進(jìn)行培養(yǎng),以獲得大量雌雄成蟲供鑒定。