產(chǎn)品名稱：Fast Pfu DNA Polymerase
中文名稱：快速Pfu DNA聚合酶

產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：

產(chǎn)品描述：本制品是通過采用分子進(jìn)化技術(shù)對(duì)普通Pfu梅進(jìn)行改造而獲得的 新型Fast Pfu梅，是新一代的高保真DNA聚合酶。該酶解決了高保真PCR反應(yīng)中Pfu梅擴(kuò)增靈敏度低、延伸速度緩慢的難題，能夠高效、快速擴(kuò)增≤6kb片段目的基因片段（樶長(zhǎng)可達(dá)20kb），模板低至0.05ng， 并且在DNA末端補(bǔ)平、全基因合成、引入突變等之中有著很好的應(yīng)用。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

高保真：保真度高于Pfu梅，為普通Taq酶的50倍。

快速高效：Fast Pfu擴(kuò)增速度為普通Pfu梅的數(shù)倍，72℃保溫30秒可延伸1kb以上。擴(kuò)增長(zhǎng)度可達(dá)20kb，能高效擴(kuò)增≤6kb片段。

高靈敏：可從0.05ng人基因組DNA模板中擴(kuò)增出1.2kb特定基因片段，擴(kuò)增性能顯著優(yōu)于普通Pfu梅。

*配方的 5×Buffer：使PCR 擴(kuò)增反應(yīng)更加穩(wěn)定、靈敏、高效。

產(chǎn)品用途：用于要求保真度比較高的PCR反應(yīng)，包括克龍PCR、DNA片段拼接、引入突變、全基因合成、DNA末端補(bǔ)平等，也用于復(fù)雜模板， 高GC/AT 模板的擴(kuò)增。

使用建議：（Fast Pfu DNA聚合酶產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物為平末端，無3′端"A"突出， 除使用環(huán)凱PCR一步定向克龍?jiān)噭┖校–at. No: HKNR001）外， 其它PCR 產(chǎn)物的克龍方案有：）

1）PCR前引物進(jìn)行5′端加磷修飾或?qū)CR產(chǎn)物麟酸化處理后再直接克龍于平末端的載體中。

2）將產(chǎn)物3′末端加A后再與T載體連接。

3）由于Fast Pfu DNA聚合酶的校對(duì)活性可引起引物從3′端被部分降解。因此在設(shè)計(jì)引物時(shí)應(yīng)適當(dāng)增加引物的長(zhǎng)度，理想的引物長(zhǎng)度為20～30mers。另外為了減少由3′→5′外切酶活性引起的引物降解，盡量在冰上配制反應(yīng)體系，并樶后加入Fast Pfu DNA聚合酶。

應(yīng)用實(shí)例：圖例一）50μL 擴(kuò)增體系中，λDNA 為模板，擴(kuò)增 1kb~20kb 片段。

泳道 M：λ/Hind III DNA Marker；

泳道 1：1kb；

泳道 2：2kb；

泳道 3：4kb；

泳道 4：6kb；

泳道 5：8kb；

泳道 6：10kb；

泳道7：12kb；

泳道 8：20kb

保存溫度：-20℃。

產(chǎn)品包裝（A 包裝）：

活性定義：在74℃條件下，30 分鐘內(nèi)催化 10nmol dNTPs 摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量為一個(gè)單位。。

常用反應(yīng)體系（50μL）：

常用PCR 循環(huán)：

注意事項(xiàng)：

1)對(duì)高 GC 含量模板，建議將變性溫度提高到 98℃。

2)對(duì)于高 GC 模板，建議配套使用 PCR 增強(qiáng)劑 I（Cat. No: HKE050）和 PCR 增強(qiáng)劑 II（Cat. No: HKE051），或者添加終濃度為 5%-8% DMSO。