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貨物所在地:北京北京市
所在地: 北京
更新時(shí)間:2024-08-25 21:00:07
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CAS號(hào)58-58-2 嘌呤霉素 分裝
貨號(hào):P8230
規(guī)格:25mg/100mg
英文名稱 : Puromycin
CAS : 58-58-2
分子式 : C22H29N7O5·2HCl
分子量 : 544.43
儲(chǔ)存條件 : -20℃
純度 : ≥98%(TLC)
單位 : 支
外觀(性狀) : 白色或白中帶有黃色的粉末
商品貨號(hào): | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價(jià): | 選擇規(guī)格 |
---|---|---|---|---|
P8230-100mg | Solarbio | 100mg | 1500.00元 | |
P8230-25mg | Solarbio | 25mg | 400.00元 |
說(shuō)明:蛋白質(zhì)合成抑制劑。抑制細(xì)菌、藻類原生物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)。
嘌呤霉素(Puromycin)是由白黑鏈霉菌(Streptomyces alboniger)發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過(guò)抑制蛋白質(zhì)合成而殺死革蘭氏陽(yáng)性菌,各種動(dòng)物和昆蟲(chóng)細(xì)胞。某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。作用機(jī)制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的類似物,能夠與核糖體的A位點(diǎn)結(jié)合并摻入到延伸的肽鏈中。嘌呤霉素同A位點(diǎn)結(jié)合后,不會(huì)參與隨后的任何反應(yīng),從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素產(chǎn)生菌Streptomyces alboniger內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(PAC),賦予機(jī)體對(duì)嘌呤霉素產(chǎn)生抗性。這一特性如今普遍應(yīng)用于篩選特定攜帶pac基因質(zhì)粒的哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。
嘌呤霉素在細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選中的普遍應(yīng)用與慢病毒載體的特性有關(guān),現(xiàn)在商業(yè)化的慢病毒載體多數(shù)都攜帶pac基因。在某些特定情況下,嘌呤霉素亦可以用來(lái)篩選轉(zhuǎn)化攜帶pac基因質(zhì)粒的大腸桿菌菌株。
溶解性:溶于水,參考濃度50mg/ml。
使用方法
1.建議使用濃度
哺乳動(dòng)物細(xì)胞:1-10 μg/mL,佳濃度需要?dú)缜€來(lái)確定;
大腸桿菌:LB瓊脂培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)化pac基因的大腸桿菌,使用濃度為125μg/mL。注:使用嘌呤霉素篩選大腸桿菌穩(wěn)轉(zhuǎn)株需要的pH值調(diào)節(jié),而且受宿主細(xì)胞本身的影響。
2.溶解方法
用蒸餾水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/ml的母液,經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌后分裝于-20℃凍存;也可溶于甲醇,配制成10 mg/ml的儲(chǔ)存液。
3. 嘌呤霉素殺滅曲線的確定(以shRNA轉(zhuǎn)染或者慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)為例)
嘌呤霉素有效篩選濃度跟細(xì)胞類型、生長(zhǎng)狀態(tài)、細(xì)胞密度、細(xì)胞代謝情況及細(xì)胞所處細(xì)胞周期位置等有關(guān)。為了篩選到穩(wěn)定表達(dá)的shRNA細(xì)胞株,確定殺死未轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的低濃度嘌呤霉素關(guān)重要。建議初次做實(shí)驗(yàn)的客戶一定要建立適合自身實(shí)驗(yàn)體系的殺死曲線(kill curve)。
1) Day 1:24孔板內(nèi)以5~8 x 104 cells/孔的密度鋪板,鋪?zhàn)銐蛄康目滓赃M(jìn)行后續(xù)的梯度實(shí)驗(yàn)。37℃細(xì)胞孵育;
2) Day 2:a)準(zhǔn)備篩選培養(yǎng)基:含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基(如0-15μg/mL,少5個(gè)梯度);b)往孵育后的細(xì)胞內(nèi)更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基;之后37℃孵育細(xì)胞;
3) Day 4:更換新鮮的篩選培養(yǎng)基,并觀察細(xì)胞存活率。
4) 根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài),約2-3天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基;
5) 每日監(jiān)測(cè)細(xì)胞,觀察存活細(xì)胞率,從而確定抗生素篩選開(kāi)始4-6天內(nèi)有效殺死非轉(zhuǎn)染或者所有非轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的藥物低濃度。
4. 哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的篩選
等轉(zhuǎn)染含有pac基因的質(zhì)粒后,細(xì)胞在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中增殖,以篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子。
1)細(xì)胞轉(zhuǎn)染48h后,將細(xì)胞(原樣或稀釋)置于含有適當(dāng)濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
注意:當(dāng)細(xì)胞處于活躍期時(shí),抗生素作用明顯。細(xì)胞過(guò)于密集,抗生素產(chǎn)生的效力會(huì)明顯下降。好進(jìn)行細(xì)胞分盤使其密度不超過(guò)25%。
2)每隔2-3天,移除和更換含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基。
3)篩選7天后評(píng)估細(xì)胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時(shí)間,這依賴于宿主細(xì)胞系和轉(zhuǎn)染篩選效率。注意:每日進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的觀察。嘌呤霉素的篩選少需要48h,有效濃度嘌呤霉素的篩選周期一般在3-10天。
4)轉(zhuǎn)移和放置5-10個(gè)抗性克隆到一個(gè)35mm的培養(yǎng)皿中,用選擇培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7天。此次富集培養(yǎng)是為日后的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。
注意事項(xiàng)
1)為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2)嘌呤霉素為有毒化合物,操作時(shí)請(qǐng)小心拿放。
CAS號(hào)58-58-2 嘌呤霉素 分裝訂購(gòu)說(shuō)明:
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨,一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品,需提前1-2日預(yù)訂,海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會(huì)因貨期、批次等因素發(fā)生變化,若有變動(dòng)以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整,部分城市可到17點(diǎn)整,因超過(guò)截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請(qǐng)辦理完貨款后,將收據(jù)、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。
CAS號(hào)58-58-2 嘌呤霉素 分裝運(yùn)輸說(shuō)明:
1、極低溫產(chǎn)品:極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來(lái),再用泡沫盒密封,膠帶層層粘住泡沫盒,放入索萊寶的箱子,然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
2、低溫產(chǎn)品:低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來(lái),再使用泡沫盒密封,用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒,再放入索萊寶的箱子(保溫效果少可以持續(xù)一周),然后交付給合作快遞,安全快速高效放心的送客戶的手中,保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一,為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
3、常溫產(chǎn)品:常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過(guò)程中無(wú)需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫(kù)房人員快速配貨,準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。
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