目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC3295結(jié)合態(tài)淀粉合成酶活性檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100管/96樣 |
| 貨號 | BC3295 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,食品,化工,農(nóng)業(yè),制藥 |
| 主要用途 | 結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)活性檢測 |
結(jié)合態(tài)淀粉合成酶活性檢測試劑盒 微量法
注意：正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
貨號：BC3295
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：30mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃保存；
試劑四：粉劑×2瓶，4℃保存；臨用前加入5mL試劑一充分混勻備用；
試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入10mL試劑一充分混勻備用；
試劑六：粉劑×1支，-20℃保存；臨用前加入500μL雙蒸水，充分溶解備用；
試劑七：液體250μL×2支，-20℃保存；
試劑八：液體12.5μL×2支；每支臨用前加入溶解好的4mL試劑四。
反應(yīng)液Ⅰ的配制：臨用前在試劑二中加入14mL試劑一，緩慢加熱，逐漸升溫使其溶解，冷卻后將其加入試劑三混合溶解。這樣可以分兩批配制并且測定。
產(chǎn)品說明：
GBSS（EC 2.4.1.21）以束縛態(tài)存在于淀粉體中，催化淀粉鏈的加長反應(yīng)，主要負(fù)責(zé)直鏈淀粉的合成。
GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上，同時(shí)生成ADP；進(jìn)一步通過反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH，其中NADPH生成量與前一步反應(yīng)生成的ADP數(shù)量呈正比，通過340nm下測定NADPH的增加量，可以計(jì)算GBSS活性。
需自備的的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、粗酶液制備
稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g ，4℃離心10min，棄上清，在沉淀中加入1mL提取液充分混勻，置冰上待測。
二、測定步驟
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、在EP管中按順序加入下列試劑
試劑名稱（μL） | 測定管 |
樣本 | 100 |
反應(yīng)液Ⅰ | 135 |
混勻，30℃保溫20 min，置沸水浴中1 min（蓋緊，防止水分散失），冰浴冷卻 | |
試劑八 | 75 |
混勻，30℃保溫30 min，置沸水浴中1 min（蓋緊，防止水分散失），冰浴冷卻，10000g 常溫離心10min，取上清液（如果一次性測定樣本較多，可以將試劑四、五和六按比例配成混合液） | |
上清液 | 150 |
試劑五 | 100 |
試劑六 | 5 |
試劑七 | 5 |
混勻后立即轉(zhuǎn)移200μL微量石英比色皿或96孔板中， 340 nm波長下記錄初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
注意：試劑二如有沉淀，加入之前要使之充分溶解混勻。
三、GBSS活性計(jì)算
a.使用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下：
1、按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白在1mL反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
GBSS活性（U/mg prot）= [ΔA÷（ε×d）×V測]÷(Cpr×V樣÷V反總×V上清) ÷T=432×ΔA÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。
2、按照樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織在1mL反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
GBSS活性（U/g 鮮重）=[ΔA÷（ε×d）×V測×109]÷(W÷V提取×V樣÷V反總×V上清) ÷T= 432×ΔA÷W 。
V測：測量體積，0.26m L；V樣：加入樣本體積，0.1m L；V反總：反應(yīng)體積，0.31mL；V上清：加入上清液體積，0.15mL；V提?。杭尤胩崛∫后w積，1×10-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×10-3mL/nmoL/cm；d：比色皿光徑，1cm；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。
b.使用96孔板測定的計(jì)算公式如下：
1、按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
GBSS活性（U/mg prot）=[ΔA÷（ε×d）×V測]÷(Cpr×V樣÷V反總×V上清) ÷T =720×ΔA÷Cpr。
此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度。
2、按照樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
GBSS活性（U/g 鮮重）=[ΔA÷（ε×d）×V測]÷(W÷V提取×V樣÷V反總×V上清) ÷T=720×ΔA÷W。
V測：測量體積，0.26m L；V樣：加入樣本體積，0.1m L；V反總：反應(yīng)體積，0.31mL；V上清：加入上清液體積，0.15mL；V提?。杭尤胩崛∫后w積，1×10-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×10-3mL/nmoL/cm；d：比色皿光徑，1cm；T：反應(yīng)時(shí)間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。
結(jié)合態(tài)淀粉合成酶活性檢測試劑盒 微量法訂購說明：
1、絕大部分產(chǎn)品備有現(xiàn)貨，一般情況下都能訂貨當(dāng)日發(fā)貨。
2、部分非常用產(chǎn)品，需提前1－2日預(yù)訂，海外期貨則需要提前3-6周預(yù)訂。
3、部分產(chǎn)品價(jià)格會因貨期、批次等因素發(fā)生變化，若有變動以訂貨當(dāng)日新價(jià)格為準(zhǔn)。
4、每日訂單截止時(shí)間為16點(diǎn)整，部分城市可到17點(diǎn)整，因超過截止時(shí)間造成當(dāng)日不能發(fā)貨的將于次日安排發(fā)貨。
5、請辦理完貨款后，將底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。
運(yùn)輸說明：
極低溫產(chǎn)品：極低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝干冰運(yùn)輸。用干冰把產(chǎn)品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
低溫產(chǎn)品：低溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中加裝索萊寶冰袋運(yùn)輸。事先用冰袋把產(chǎn)品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴(yán)實(shí)密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續(xù)一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產(chǎn)品的性質(zhì)穩(wěn)定如一，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。
常溫產(chǎn)品：常溫產(chǎn)品運(yùn)輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產(chǎn)品由公司庫房人員快速配貨，準(zhǔn)確快速高效的快遞保證產(chǎn)品快速送達(dá)您的手中。
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