目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC0015-100T/96S單胺氧化酶活性檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
| 貨號 | BC0015 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 單胺氧化酶活性檢測 |
單胺氧化酶（MAO）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC0015
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品內(nèi)容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液一 | 液體110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
提取液二 | 液體110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體45mL×3瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體3 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
產(chǎn)品說明：
MAO（EC1.4.3.4）包括MAO-A和MAO-B，是一種結(jié)合在線粒體外膜上的黃素蛋白，可催化神經(jīng)遞質(zhì)和生物胺氧化脫氨。單胺氧化酶與機體老化有關(guān)，被認為是衰老的標志，其主要存在于脊椎動物的各種器官，特別是分泌腺、腦、肝臟，在無脊椎動物、豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝，含量較低，具有重要的生理功能。
MAO催化單胺類底物脫氨生成相應(yīng)的醛，進一步氧化成酸，底物在360nm處有特征吸收峰，通過測定360nm處光吸收下降的速率，可計算MAO活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、震蕩儀、蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、 臨用前根據(jù)實驗用量取出部分提取液一、提取液二和試劑一置于4℃預(yù)冷30min。
2、 組織樣本：按照樣本質(zhì)量（g）：提取液一體積（mL）為1:5~10 的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴勻漿；1000g 4℃離心10min，取上清，將上清液轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的離心管，于10000g，4℃離心30min。棄上清，沉淀中加入1mL預(yù)冷的提取液二，振蕩混勻，于16000g，4℃離心40min，棄上清，加入1mL試劑一，振蕩混勻，置冰上待測。
3、 細菌或細胞樣本：收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清，按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液一體積（mL）為 500~1000:1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液一）加入提取液一，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率200W，超聲3s，間隔7s，總時間3min），1000g，4℃離心10min，取上清，將上清液轉(zhuǎn)移至預(yù)冷的離心管，于10000g，4℃離心30min。棄上清，沉淀中加入1mL預(yù)冷的提取液二，振蕩混勻，于16000g，4℃離心40min，棄上清，沉淀中加入1mL試劑一，振蕩混勻，置冰上待測。
4、 血清（漿）或液體樣本：直接檢測。若溶液渾濁則離心后取上清進行測定。
二、測定步驟
1、紫外分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至360nm，分光光度計用蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表（在微量石英比色皿/96孔UV板中依次加入下列試劑)：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 空白管 |
樣本（μL） | 20 | - |
試劑一（μL） | 160 | 180 |
試劑二（μL） | 20 | 20 |
將上述試劑分別加入微量石英比色皿/96孔UV板中，迅速吹打混勻，分別測定360nm處 第10s的吸光值，記為A測定管1、A空白管1；然后置于37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中準確反應(yīng)2h，測定360nm處吸光值，記為A測定管2、A空白管2，計算ΔA測定=A測定管1-A測定管2，ΔA空白= A空白管1-A空白管2。ΔA=ΔA測定-ΔA空白。空白管只需測1-2次。 | ||
三、MAO活力的計算
a．用微量石英比色皿測定的計算公式如下：
1、按樣本蛋白質(zhì)濃度計算
酶活定義：37℃，pH7.6條件下，每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol底物的酶量定義為一個酶活單位。
MAO活性（U/mg prot）= ΔA÷?÷d×V反總×109÷(V樣×Cpr)÷T=57.08×ΔA÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算
酶活定義：37℃，pH7.6條件下，每mg組織每分鐘消耗1nmol底物定義的酶量為一個酶活單位。
MAO活性（U /g 質(zhì)量）= ΔA÷?÷d×V反總×109÷(V樣÷V樣總×W)÷T=57.08×ΔA÷W
3、按細菌/細胞數(shù)量計算
酶活定義：37℃，pH7.6條件下，每104細菌/細胞每分鐘消耗1nmol底物的酶量定義為一個酶活單位。
MAO活性（U /104 cell）= ΔA÷?÷d×V反總×109÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量)÷T=57.08×ΔA÷細胞數(shù)量
4、 按照樣本體積計算
酶活定義：37℃，pH7.6條件下，每mL血清或液體樣本每分鐘消耗1nmol 底物的酶量為一個酶活單位。
MAO 活性（U /mL）=ΔA÷?÷d ×V反總×109÷V樣÷T= 57.08×ΔA
ε：底物摩爾消光系數(shù)：1460L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.0002L；V樣：加入樣本體積，0.02mL，V樣總：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，120min；109：單位換算系數(shù)，1mol=109nmol。
b．用96孔UV板測定的計算公式如下：
1、按樣本蛋白質(zhì)濃度計算
酶活定義：37℃，pH7.6條件下，每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol底物的酶量定義為一個酶活單位。
MAO活性（U /mg prot）= ΔA÷?÷d×V反總×109÷(V樣×Cpr)÷T= 95.13×ΔA÷Cpr
2、按樣本質(zhì)量計算
酶活定義：37℃，pH7.6條件下，每g組織每分鐘消耗1nmol底物的酶量定義為一個酶活單位。
MAO活性（U /g 質(zhì)量）= ΔA÷?÷d×V反總×109÷(V樣÷V樣總×W)÷T= 95.13×ΔA÷W
3、按細菌/細胞數(shù)量計算
酶活定義：37℃，pH7.6條件下，每104細菌/細胞每分鐘消耗1nmol底物的酶量定義為一個酶活單位。
MAO活性（U /104 cell）= ΔA÷?÷d×V反總×109÷(V樣÷V樣總×細胞數(shù)量)÷T= 95.13×ΔA÷細胞數(shù)量
4、 按照樣本體積計算
酶活定義：37℃，pH7.6條件下，每mL血清或液體樣本每分鐘消耗1nmol 底物的酶量為一個酶活單位。
MAO 活性（U/mL）=ΔA÷?÷d ×V反總×109÷V樣÷T = 95.13×ΔA
ε：底物摩爾消光系數(shù)：1460L/mol/cm；d：96孔UV板光徑，0.6cm；V反總：反應(yīng)總體積，0.0002L；V樣：加入樣本體積，0.02mL，V樣總：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時間，120min；109：單位換算系數(shù)，1mol=109nmol。
參考文獻：
[1] Bolea I, Gella A, Unzeta M. Propargylamine-derived multitarget-directed ligands: fighting Alzheimer's disease with monoamine oxidase inhibitors[J]. J Neural Transm. 2013, 120(6):893-902.
[2] Schmidt K, Li Z, Schubert B, et al. Screening of entomopathogenic Deuteromycetes for activities on targets involved in degenerative diseases of the central nervous system[J]. Journal of Ethnopharmacology. 2003, 89(2-3):251-260.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC1090/BC1095 黃*呤氧化酶（XOD）活性檢測試劑盒
BC1280/BC1285 二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒
單胺氧化酶活性檢測試劑盒 微量法 單胺氧化酶活性檢測試劑盒 微量法
15
化工儀器網(wǎng)