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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC4955-100T/48S海藻糖合成酶(TS)活性檢測(cè)試劑盒 微量法

海藻糖合成酶(TS)活性檢測(cè)試劑盒 微量法
  • 海藻糖合成酶(TS)活性檢測(cè)試劑盒 微量法
參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號(hào) BC4955-100T/48S
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 產(chǎn)品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時(shí)間:2024-04-17 17:12:54瀏覽次數(shù):441評(píng)價(jià)

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CAS 詳詢 純度 詳詢
分子量 詳詢 分子式 詳詢
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100T/48S
貨號(hào) BC4945 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合
主要用途 海藻糖合成酶(TS)活性檢測(cè)
海藻糖合成酶(TS)活性檢測(cè)試劑盒 微量法
有效期
6個(gè)月
儲(chǔ)存條件
2-8℃
單位

英文名稱(chēng)
Trehalose synthase (TS) Activity Assay Kit
檢測(cè)方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
規(guī)格
100T/48S

海藻糖合成酶(TS)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法

注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。

貨號(hào):BC4955

規(guī)格:100T/48S

產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱(chēng)

規(guī)格

保存條件

提取液

液體60 mL×1

2-8℃保存

試劑一

液體6mL×1

2-8℃保存

試劑二

粉劑×2

2-8℃保存

試劑三

液體15 mL×1

2-8℃保存

試劑四

液體15 mL×1

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品

粉劑×1

2-8℃保存

溶液的配制:

1、 試劑二:臨用前取一瓶先加入6mL蒸餾水,震蕩使其充分溶解(若溶解后的試劑中有黑色顆粒物,可離心后取上清使用),用不完的試劑2-8℃保存2周。

2、 工作液的配制:臨用前將試劑三和試劑四1:1等體積混合,根據(jù)樣本實(shí)際所需用量現(xiàn)配現(xiàn)用。

3、 標(biāo)準(zhǔn)品:臨用前加入1 mL蒸餾水配制成50 μmol/mL的麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,用不完的試劑2-8℃保存2周。然后用蒸餾水八倍稀釋成6.25 μmol/mL的麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(建議吸取25 μL 50μmol/mL麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,加入175 μL蒸餾水中,充分混勻)待測(cè),現(xiàn)用現(xiàn)配。

產(chǎn)品說(shuō)明:

海藻糖是功能性低聚糖,具有非還原性、保濕性、熱酸穩(wěn)定性、抗凍結(jié)性等特性,是細(xì)胞在不良環(huán)境條件下產(chǎn)生的一種重要的抗逆應(yīng)激物之一,它對(duì)生物大分子和生物組織有著非特異性的保護(hù)作用。

海藻糖合成酶(Trehalose SynthaseTS)能催化麥芽糖生成海藻糖,是海藻糖生物合成的關(guān)鍵途徑之一。本試劑盒使用糖化酶分解剩余麥芽糖為葡萄糖,通過(guò)葡萄糖氧化酶法測(cè)定葡萄糖含量,按照麥芽糖減少的量表示海藻糖合成酶的活性。

注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。

需自備的儀器和用品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、

 

蒸餾水。

操作步驟:

一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1 mL提取液,超聲波破碎細(xì)胞(功率200W,超聲3s,間隔9s,重復(fù)30次);然后8000 g,4℃,離心10 min,取上清(若上清不夠澄清,建議重復(fù)上述離心步驟),置于冰上待檢。

組織:按照組織質(zhì)量(g: 提取液體積(mL)為1 : 5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1 g組織,加入1 mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000 g4℃,離心10 min,取上清(若上清不夠澄清,建議重復(fù)上述離心步驟,置于冰上待檢。

二、測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至505 nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 操作表:

1)酶促反應(yīng)(在EP管中進(jìn)行以下操作):

加入試劑(μL

對(duì)照管

測(cè)定管

標(biāo)準(zhǔn)管

空白管

樣本

50

50

-

-

試劑一

-

50

-

-

標(biāo)準(zhǔn)溶液

-

-

50

-

蒸餾水

-

-

50

100

充分混勻,35℃水浴反應(yīng)2 h,沸水浴5 min終止反應(yīng),冷卻至室溫。

-

-

試劑一

50

-

-

-

試劑二

100

100

100

100

混勻,40℃過(guò)夜反應(yīng)(12 h以上),沸水浴5 min終止反應(yīng),冷卻至室溫。10000 g ,25℃離心10 min,取上清待測(cè)。

2)顯色反應(yīng)(在EP管或96孔板中進(jìn)行以下操作)

加入試劑(μL

對(duì)照管

測(cè)定管

標(biāo)準(zhǔn)管

空白管

上清液

20

20

20

20

工作液

180

180

180

180

充分混勻,37℃反應(yīng)30 min,于微量玻璃比色皿或96孔板中測(cè)定505 nm處的吸光值,分別記為A對(duì)照、A測(cè)定、A標(biāo)準(zhǔn)與A空白,ΔA測(cè)定=A對(duì)照-A測(cè)定、ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。

注:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)1~2次。

三、酶活性計(jì)算

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化1 nmol 麥芽糖生成1 nmol 海藻糖定義為一個(gè)酶活力單位。

TS活(U/mg prot= C標(biāo)×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V÷V×Cpr÷T×F×1000÷2

=26.041×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr×F

2、按樣本質(zhì)量計(jì)算:

單位的定義:每g組織每分鐘催化1 nmol 麥芽糖生成1 nmol 海藻糖定義為一個(gè)酶活力單位。

TS活(U/g 質(zhì)量)= C標(biāo)×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V÷V÷V樣總×W÷T×F×1000÷2

=26.041×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F

 

3、按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算:

單位的定義:每104個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化1 nmol 麥芽糖生成1 nmol 海藻糖定義為一個(gè)酶活力單位。

TS活(U/104 cell= C標(biāo)×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V÷V÷V樣總×cell÷T×F×1000÷2

=26.041×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷cell×F

C標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,6.25 μmol/mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,120 minCpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mLW:樣本質(zhì)量,g;cell:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),以萬(wàn)計(jì);F:稀釋倍數(shù);1000:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1 μmol=1000 nmol;21分子麥芽糖可轉(zhuǎn)化為2分子葡萄糖。

注意事項(xiàng):

1、 當(dāng)吸光值大于1.5或者ΔA測(cè)定大于1時(shí),建議將樣本稀釋后測(cè)量。計(jì)算公式注意乘以稀釋倍數(shù)。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例:

1、 0.1 g小鼠肝臟加入1 mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清用蒸餾水稀釋2倍后按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)定后計(jì)算ΔA測(cè)定=A對(duì)照-A測(cè)定=1.177-0.536=0.641ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=1.031-0.049=0.982,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

TS活(U/g 質(zhì)量)= 26.041×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F=339.965 U/g 質(zhì)量。

2、 0.1 g海帶加入1 mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)定后計(jì)算ΔA測(cè)定=A對(duì)照-A測(cè)定=1.366-0.793=0.573、ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=1.031-0.049=0.982按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:

TS活(U/g質(zhì)量)= 26.041×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F=151.950 U/g 質(zhì)量。

相關(guān)系列產(chǎn)品:

BC0330/BC0335 海藻糖含量檢測(cè)試劑盒

BC2510/BC2515 海藻糖酶(THL)活性檢測(cè)試劑盒

海藻糖合成酶(TS)活性檢測(cè)試劑盒 微量法 海藻糖合成酶(TS)活性檢測(cè)試劑盒 微量法

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