目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC4955-100T/48S海藻糖合成酶(TS)活性檢測(cè)試劑盒 微量法
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更新時(shí)間:2024-04-17 17:12:54瀏覽次數(shù):441評(píng)價(jià)
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CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
---|---|---|---|
分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
貨號(hào) | BC4945 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
主要用途 | 海藻糖合成酶(TS)活性檢測(cè) |
海藻糖合成酶(TS)活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書(shū)操作。
貨號(hào):BC4955
規(guī)格:100T/48S
產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱(chēng) | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體6mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 2-8℃保存 | |
試劑四 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 試劑二:臨用前取一瓶先加入6mL蒸餾水,震蕩使其充分溶解(若溶解后的試劑中有黑色顆粒物,可離心后取上清使用),用不完的試劑2-8℃保存2周。
2、 工作液的配制:臨用前將試劑三和試劑四1:1等體積混合,根據(jù)樣本實(shí)際所需用量現(xiàn)配現(xiàn)用。
3、 標(biāo)準(zhǔn)品:臨用前加入1 mL蒸餾水配制成50 μmol/mL的麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,用不完的試劑2-8℃保存2周。然后用蒸餾水八倍稀釋成6.25 μmol/mL的麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)溶液(建議吸取25 μL 50μmol/mL麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,加入175 μL蒸餾水中,充分混勻)待測(cè),現(xiàn)用現(xiàn)配。
產(chǎn)品說(shuō)明:
海藻糖是功能性低聚糖,具有非還原性、保濕性、熱酸穩(wěn)定性、抗凍結(jié)性等特性,是細(xì)胞在不良環(huán)境條件下產(chǎn)生的一種重要的抗逆應(yīng)激物之一,它對(duì)生物大分子和生物組織有著非特異性的保護(hù)作用。
海藻糖合成酶(Trehalose Synthase,TS)能催化麥芽糖生成海藻糖,是海藻糖生物合成的關(guān)鍵途徑之一。本試劑盒使用糖化酶分解剩余麥芽糖為葡萄糖,通過(guò)葡萄糖氧化酶法測(cè)定葡萄糖含量,按照麥芽糖減少的量表示海藻糖合成酶的活性。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、
蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1 mL提取液,超聲波破碎細(xì)胞(功率200W,超聲3s,間隔9s,重復(fù)30次);然后8000 g,4℃,離心10 min,取上清(若上清不夠澄清,建議重復(fù)上述離心步驟),置于冰上待檢。
組織:按照組織質(zhì)量(g): 提取液體積(mL)為1 : 5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1 g組織,加入1 mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000 g,4℃,離心10 min,取上清(若上清不夠澄清,建議重復(fù)上述離心步驟,置于冰上待檢。
二、測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至505 nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 操作表:
(1)酶促反應(yīng)(在EP管中進(jìn)行以下操作):
加入試劑(μL) | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
樣本 | 50 | 50 | - | - |
試劑一 | - | 50 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)溶液 | - | - | 50 | - |
蒸餾水 | - | - | 50 | 100 |
充分混勻,35℃水浴反應(yīng)2 h,沸水浴5 min終止反應(yīng),冷卻至室溫。 | - | - | ||
試劑一 | 50 | - | - | - |
試劑二 | 100 | 100 | 100 | 100 |
混勻,40℃過(guò)夜反應(yīng)(12 h以上),沸水浴5 min終止反應(yīng),冷卻至室溫。10000 g ,25℃離心10 min,取上清待測(cè)。 |
(2)顯色反應(yīng)(在EP管或96孔板中進(jìn)行以下操作)
加入試劑(μL) | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
上清液 | 20 | 20 | 20 | 20 |
工作液 | 180 | 180 | 180 | 180 |
充分混勻,37℃反應(yīng)30 min,于微量玻璃比色皿或96孔板中測(cè)定505 nm處的吸光值,分別記為A對(duì)照、A測(cè)定、A標(biāo)準(zhǔn)與A空白,ΔA測(cè)定=A對(duì)照-A測(cè)定、ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。 |
注:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)1~2次。
三、酶活性計(jì)算
1、按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘催化1 nmol 麥芽糖生成1 nmol 海藻糖定義為一個(gè)酶活力單位。
TS酶活(U/mg prot)= C標(biāo)×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V樣÷(V樣×Cpr)÷T×F×1000÷2
=26.041×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr×F
2、按樣本質(zhì)量計(jì)算:
單位的定義:每g組織每分鐘催化1 nmol 麥芽糖生成1 nmol 海藻糖定義為一個(gè)酶活力單位。
TS酶活(U/g 質(zhì)量)= C標(biāo)×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V樣÷(V樣÷V樣總×W)÷T×F×1000÷2
=26.041×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F
3、按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算:
單位的定義:每104個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化1 nmol 麥芽糖生成1 nmol 海藻糖定義為一個(gè)酶活力單位。
TS酶活(U/104 cell)= C標(biāo)×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V樣÷(V樣÷V樣總×cell)÷T×F×1000÷2
=26.041×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷cell×F
C標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)管濃度,6.25 μmol/mL;V樣總:加入提取液體積,1 mL;V樣:加入樣本體積,0.05 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,120 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;cell:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),以萬(wàn)計(jì);F:稀釋倍數(shù);1000:?jiǎn)挝粨Q算系數(shù),1 μmol=1000 nmol;2:1分子麥芽糖可轉(zhuǎn)化為2分子葡萄糖。
注意事項(xiàng):
1、 當(dāng)吸光值大于1.5或者ΔA測(cè)定大于1時(shí),建議將樣本稀釋后測(cè)量。計(jì)算公式注意乘以稀釋倍數(shù)。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
1、 取0.1 g小鼠肝臟加入1 mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清用蒸餾水稀釋2倍后按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)定后計(jì)算ΔA測(cè)定=A對(duì)照-A測(cè)定=1.177-0.536=0.641、ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=1.031-0.049=0.982,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:
TS酶活(U/g 質(zhì)量)= 26.041×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F=339.965 U/g 質(zhì)量。
2、 取0.1 g海帶加入1 mL提取液進(jìn)行勻漿研磨,取上清按照測(cè)定步驟操作,用96孔板測(cè)定后計(jì)算ΔA測(cè)定=A對(duì)照-A測(cè)定=1.366-0.793=0.573、ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白=1.031-0.049=0.982,按樣本質(zhì)量計(jì)算酶活得:
TS酶活(U/g質(zhì)量)= 26.041×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W×F=151.950 U/g 質(zhì)量。
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC0330/BC0335 海藻糖含量檢測(cè)試劑盒
BC2510/BC2515 海藻糖酶(THL)活性檢測(cè)試劑盒
海藻糖合成酶(TS)活性檢測(cè)試劑盒 微量法 海藻糖合成酶(TS)活性檢測(cè)試劑盒 微量法
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