目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC5275-100T/48S植物根系活力(TTC法)檢測(cè)試劑盒 微量法
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更新時(shí)間:2024-04-19 09:46:21瀏覽次數(shù):629評(píng)價(jià)
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CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
貨號(hào) | BC5275 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
主要用途 | 植物根系活力(TTC法)檢測(cè) |
植物根系活力檢測(cè)試劑盒(TTC法)說明書
微量法
貨號(hào):BC5275
規(guī)格:100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一A | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一B | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體125 mL×1瓶 | |
試劑三 | 粉劑×3支 | 常溫保存 |
試劑四 | 液體120 mL×1瓶(自備) | 2-8℃保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
1、 試劑一:臨用前取一支試劑一B加入一瓶試劑一A中,加入30mL試劑二溶解?,F(xiàn)用現(xiàn)配。配制好后置于2-8℃,一周內(nèi)使用,若出現(xiàn)紅色,則不能使用。
2、 試劑二:若試劑有結(jié)晶析出,可40℃加熱或者超聲溶解。
3、 試劑四:乙酸乙酯,自備。提供一125mL 空瓶。
4、 標(biāo)準(zhǔn)品:臨用前加入1mL試劑二,充分震蕩混勻, 即10mg/mL TTC標(biāo)準(zhǔn)液。2-8℃可以保存1周,若出現(xiàn)紅色,則不能使用。
產(chǎn)品說明:
根系是植物吸收水分和礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)的主要器官,同時(shí)又是植物體中重要物質(zhì)如氨基酸、激素等物質(zhì)合成、同化、轉(zhuǎn)化的器官,因此根的生長(zhǎng)情況和活動(dòng)能力直接影響植物個(gè)體的生長(zhǎng)情況、營(yíng)養(yǎng)水平和產(chǎn)量水平等,根系活力具有重要的實(shí)際意義。
TTC可被氫還原成不溶性的紅色三苯基甲臜(TTF),TTF在485nm處有吸收峰。當(dāng)TTC溶液滲入到植物根部組織時(shí),呼吸過程產(chǎn)生的還原物質(zhì)可將其還原成TTF(紅色),植物根部組織被染成紅色。根系活力強(qiáng)弱可用TTC的還原量來表示。此方法檢測(cè)的根系活力即植物根系的脫氫酶活性。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板(非聚苯乙烯材質(zhì))、研缽/勻漿器、乙酸乙酯,冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
樣本的制備:將根部組織洗凈,去除根上的泥土,輕輕擦干,不要過分?jǐn)D壓破壞根系細(xì)胞。
二、測(cè)定步驟
1、 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至485nm,可見分光光度計(jì)用乙酸乙酯調(diào)零。
2、 標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋:
(1) 臨用前取10μL 10mg/mL TTC標(biāo)準(zhǔn)液,加入1990μL試劑二,充分混勻,配制成50μg/mL TTC標(biāo)準(zhǔn)溶液,現(xiàn)用現(xiàn)配。(后續(xù)實(shí)驗(yàn)需要1000μL,為減小實(shí)驗(yàn)誤差,故配制大體積。)
(2) 取1mL 50 μg/mL TTC標(biāo)準(zhǔn)溶液加入到一支試劑三內(nèi),充分震蕩混勻2min?;靹蚝蠹尤?/span>1mL乙酸乙酯,再次充分震蕩混勻2min,室溫靜置分層5min,取上層溶液。
(3) 將上層溶液用乙酸乙酯進(jìn)行稀釋,得到20μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液備用(吸取200μL 50 μg/mL TTC加入300μL乙酸乙酯混勻即可)。
3、標(biāo)準(zhǔn)溶液的測(cè)定
取200μL 20μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液和200μL乙酸乙酯(即0μg/mL)于微量玻璃比色皿或96孔板(非聚苯乙烯材質(zhì))中,分別測(cè)定其在485nm處的吸光度。計(jì)算ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A(20μg/mL)-A(0μg/mL)。ΔA標(biāo)準(zhǔn)只需做1-2次。
4、在2mL EP管按下表步驟加樣:
試劑名稱(μL) | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
樣品 | 0.1g | 0.1g |
試劑一 | 1000 | - |
試劑二 | - | 1000 |
根部需要全部浸入溶液中,37℃暗反應(yīng)4h,取出后立即冰浴5min,去濾液,盡量用濾紙吸干根系水分,置于研缽/勻漿器中。 | ||
試劑四 | 1000 | 1000 |
充分研磨(建議在通風(fēng)櫥操作)后全部移至于離心管中,12000 rpm,4℃,離心 10min,取 200μL 上清至微量玻璃比色皿或96孔板(非聚苯乙烯材質(zhì))中,測(cè)定 485nm下的吸光值。計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照(標(biāo)準(zhǔn)曲線只需做1-2次,每一個(gè)測(cè)定管對(duì)應(yīng)一個(gè)對(duì)照管)。ΔA測(cè)定的測(cè)定范圍在0.005-1.5之間。
三、根系活力計(jì)算
按照樣本質(zhì)量計(jì)算根系活力:以TTC的還原量來表示根系活力
TTC還原強(qiáng)度 [ μg TTC/(g·h) ] =ΔA測(cè)定×C標(biāo)÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)×V÷ (W×T)=5×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W
W:根重,g;C標(biāo):標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,20μg/mL;T:反應(yīng)時(shí)間,4h;V:試劑四的體積即勻漿體積,1mL。
注意事項(xiàng):
1、 試劑四容易揮發(fā),有毒,為了您的健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服,戴口罩,戴乳膠手套操作。
2、 若樣品37℃暗反應(yīng)未到4h但根系已出現(xiàn)深粉色,此時(shí)可以直接進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)操作;若ΔA測(cè)定大于1.5,可以減少樣本質(zhì)量或者縮短反應(yīng)時(shí)間進(jìn)行實(shí)驗(yàn),計(jì)算公式注意修改。
3、 若4h暗反應(yīng)結(jié)束后,根系沒有出現(xiàn)粉色或者ΔA測(cè)定小于0.005,可以延長(zhǎng)暗反應(yīng)時(shí)間(8h,16h甚至24h)或者加大樣品量,計(jì)算公式注意修改。
4、 如果離心后待測(cè)的上清依然渾濁,可嘗試加大離心轉(zhuǎn)速或者延長(zhǎng)時(shí)間,例如15000rpm 4℃離心20min。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例:
1、 稱取0.131g蔥的根部,洗凈,擦干,按照測(cè)定步驟操作,用96孔板(非聚苯乙烯材質(zhì))測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.714-0.082=0.632,ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A(20μg/mL)-A(0μg/mL)=0.660-0.042=0.618,帶入公式計(jì)算:
TTC還原強(qiáng)度=5×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W =39.033 μg TTC/(g·h)
2、 稱取0.126g景天的根部,洗凈,擦干,按照測(cè)定步驟操作,用96孔板(非聚苯乙烯材質(zhì))測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.422-0.139=0.283,ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A(20μg/mL)-A(0μg/mL)=0.660-0.042=0.618,帶入公式計(jì)算:
TTC還原強(qiáng)度=5×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W =18.172 μg TTC/(g·h)
3、 稱取0.118g蒜的根部,洗凈,擦干,按照測(cè)定步驟操作,用96孔板(非聚苯乙烯材質(zhì))測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定-A對(duì)照=0.191-0.055=0.136,ΔA標(biāo)準(zhǔn)= A(20μg/mL)-A(0μg/mL)=0.660-0.042=0.618,帶入公式計(jì)算:
TTC還原強(qiáng)度=5×ΔA測(cè)定÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)÷W =9.325 μg TTC/(g·h)
參考文獻(xiàn):
[1] Xiuyun Zhu, Meng Liang,Yu Ma. A Review Report on the Experiments for the Determination of Root Activity by TTC Method[J]. Guangdong Chemical Industry, 2020
[1] Sangen Wang. Plant Physiology Experiment Course[M]. Science Press, 2005.
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC3120/BC3125 植物脫氫酶(PDHA)活性檢測(cè)試劑盒
植物根系活力(TTC法)檢測(cè)試劑盒 微量法 植物根系活力(TTC法)檢測(cè)試劑盒 微量法
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