目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC5535-100T/48S土壤丙酮酸含量檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
| 貨號 | BC5535 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 土壤丙酮酸含量檢測 |
土壤丙酮酸（S-PA）含量檢測試劑盒（酶法）說明書
微量法
貨號：BC5535
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體25mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
試劑三 | 液體13μL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體4 mL×1瓶 | |
標準品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 試劑二：臨用前加入3.6mL蒸餾水充分溶解，分裝保存，-20℃可以保存4周，避免反復凍融。
2、 試劑三：臨用前按試劑三：蒸餾水=1μL：100μL（共101μL，約6T）的比例進行稀釋，現(xiàn)用現(xiàn)配。
3、 標準品：20μmol/mL丙酮酸鈉標準液。
產(chǎn)品說明：
丙酮酸通過乙酰CoA連接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代謝，起著重要的樞紐作用。
在pH=7.5時，丙酮酸在LDH的催化作用下與NADH反應，生成NAD +和乳酸。在1-mPMS作用下，WST-1可與NADH反應，產(chǎn)生水溶性Formazan。通過檢測450nm條件下吸光值，可以計算出丙酮酸含量。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調式移液槍、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽、超聲清洗儀、30-50目篩和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30~50目篩。
稱取風干混勻土樣約0.1g，加入1mL蒸餾水混勻；然后置于超聲清洗儀常溫超聲30min。然后12000g，常溫離心10min，取上清液待測。
二、測定步驟
1、 分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長到450nm，蒸餾水調零。
2、 試劑一37℃至少預熱20min。
3、 標準品的制備：將20μmol/mL丙酮酸鈉標準液用蒸餾水稀釋得到0.625、0.5、0.3125、0.25、0.15625、0.125μmol/mL標準溶液備用。
4、 標準品稀釋表：
序號 | 稀釋前濃度（μmol/mL） | 標準液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（μmol/mL） |
1 | 20 | 50 | 950 | 1 |
2 | 1 | 625 | 375 | 0.625 |
3 | 0.625 | 800 | 200 | 0.5 |
4 | 0.5 | 625 | 375 | 0.3125 |
5 | 0.3125 | 800 | 200 | 0.25 |
6 | 0.25 | 625 | 375 | 0.15625 |
7 | 0.15625 | 800 | 200 | 0.125 |
實驗中每個標準管需20µL標準溶液。
5、 操作表：
三、土壤丙酮酸含量計算
1、標準曲線繪制：
根據(jù)標準管的濃度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA標準（y，ΔA標準），建立標準曲線。根據(jù)標準曲線，將ΔA測定代入方程得到x（μmol/mL）。
2、土壤丙酮酸含量計算：
土壤丙酮酸含量（μmol/g 質量）= x×V樣÷(V樣÷V提×W) = x÷W
V樣：加入的樣本體積，0.02mL；V提：前處理中加入蒸餾水的體積，1mL；W：樣本質量，g。
注意事項：
1. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者用蒸餾水稀釋樣本后再進行測定。
實驗實例：
1、 稱取約0.103g花盆土樣，加入1mL蒸餾水，超聲破碎30min，10000g，常溫離心10min，取上清待測。之后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定=（A空白1- A空白2）-（A測定-A對照）=（0.601-0.048）-（0.455-0.067）=0.165，標曲y=0.8017x-0.0471，R2=0.9985，x=0.265µmol/mL, 計算土壤丙酮酸含量得：
土壤丙酮酸含量（µmol/g 質量）= x×V樣 ÷(V樣÷V提×W) = x÷W =2.573µmol/g 質量。
2、 稱取約0.101g污泥，加入1mL蒸餾水，超聲破碎30min，10000g，常溫離心10min，取上清待測。之后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定=（A空白1- A空白2）-（A測定-A對照）=（0.601-0.048）-（0.331-0.07）=0.292，標曲y=0.8017x-0.0471，R2=0.9983，x=0.423µmol/mL, 計算土壤丙酮酸含量得：
丙酮酸含量（µmol/g 質量）= x×V樣 ÷(V樣÷V提×W) = x÷W =4.188µmol/g 質量。
相關系列產(chǎn)品：
BC5260/BC5265 丙酮酸（PA）含量檢測試劑盒
BC0380/BC0385 丙酮酸脫氫酶（PDH）活性檢測試劑盒
BC0710/BC0715 α-酮戊二酸脫氫酶（α-KGDH）活性檢測試劑盒
BC0950/BC0955 琥珀酸脫氫酶（SDH）活性檢測試劑盒
土壤丙酮酸含量檢測試劑盒 微量法 土壤丙酮酸含量檢測試劑盒 微量法
15
化工儀器網(wǎng)