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更新時(shí)間：2024-04-23 10:59:24瀏覽次數(shù)：798評(píng)價(jià)
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| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
| 貨號(hào) | BC5735 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 土壤酸性木聚糖酶活性檢測 |
土壤中性木聚糖酶（S-NEX）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號(hào)：BC5735
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
溶液的配制：
1、 標(biāo)準(zhǔn)品：10mg木糖。臨用前加入667μL蒸餾水配制成100μmol/mL的木糖標(biāo)準(zhǔn)液，2-8℃保存8周。
產(chǎn)品說明：
土壤中性木聚糖酶（Soil neutral xylanase, S-NEX），又稱為土壤中性半纖維素酶，主要分離自最適生長pH為6-8的微生物。
在中性環(huán)境中，S-NEX催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應(yīng)，在540nm處有特征吸收峰，反應(yīng)液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應(yīng)液在540nm吸光值增加速率，可計(jì)算S-NEX活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、天平、低溫離心機(jī)、水浴鍋、研缽、30~50目篩、蒸餾水。
操作步驟：具體的操作步驟請(qǐng)見“產(chǎn)品資料"文件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
新鮮土樣自然風(fēng)干或37℃烘箱風(fēng)干，過30~50目篩。
二、測定步驟
1、 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至540nm，分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。
2、 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：臨用前將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋為2、1.5、1.2、1、0.8、0.4、0.2μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液待測。
3、 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表：
序號(hào) | 稀釋前濃度（μmol/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)品體積（μL） | 蒸餾水體積（μL） | 稀釋后濃度（μmol/mL） |
1 | 100 | 100 | 900 | 10 |
2 | 10 | 200 | 800 | 2 |
3 | 10 | 150 | 850 | 1.5 |
4 | 10 | 120 | 880 | 1.2 |
5 | 10 | 100 | 900 | 1 |
6 | 1 | 200 | 50 | 0.8 |
7 | 1 | 100 | 150 | 0.4 |
8 | 1 | 50 | 200 | 0.2 |
備注：實(shí)驗(yàn)中每管需要150μL。
4、 樣本測定（在EP管中加入下列試劑）
試劑名稱（μL） | 對(duì)照管 | 測定管 | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
樣本 | 0.05g | 0.05g | - | - |
緩沖液 | 200 | 200 | - | - |
試劑一 | - | 100 | - | - |
渦旋混勻，置于50℃水浴鍋中反應(yīng)2h，立即沸水浴中10min滅活。（注意不要讓蓋子爆開，以免進(jìn)水，改變了反應(yīng)體系），冷卻至室溫。 | - | - | ||
試劑一 | 100 | - | - | - |
常溫，12000g離心10min，取上清 | - | - | ||
上清液 | 150 | 150 | - | - |
標(biāo)準(zhǔn)品 | - | - | - | 150 |
蒸餾水 | - | - | 150 | - |
試劑二 | 100 | 100 | 100 | 100 |
渦旋混勻，沸水浴中準(zhǔn)確顯色5min(注意不要讓蓋子爆開，以免進(jìn)水改變了反應(yīng)體系)，冷卻至室溫后，吸取200μL于96孔板或微量玻璃比色皿中，測定各管540nm下的吸光度，分別記為A對(duì)照、A測定、A空白、A標(biāo)準(zhǔn)。計(jì)算ΔA測定=A測定-A對(duì)照，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。空白管和標(biāo)準(zhǔn)曲線只需測1-2次。每個(gè)測定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 | ||||
注意事項(xiàng)：
1. 若樣本ΔA<0.01，可適當(dāng)增大樣本量或者延長50℃反應(yīng)時(shí)間后測定；若樣本ΔA>1.5或者A測定＞1.5時(shí)，可用蒸餾水稀釋上清液后測定，注意同步修改計(jì)算公式中的稀釋倍數(shù)。
2. 建議使用螺旋管，防止沸水浴過程中蓋子爆開，改變反應(yīng)體系。
實(shí)驗(yàn)實(shí)例：
1、 取0.05g野蘑菇土，按操作表進(jìn)行第一步反應(yīng)2h后，取上清液用蒸餾水稀釋2倍后按照測定步驟操作，用96孔板測得ΔA測定=A測定- A對(duì)照=0.891-0.200=0.691，帶入標(biāo)曲y=0.7418x-0.2302（R2=0.9992），計(jì)算x=1.242，按樣本質(zhì)量計(jì)算S-NEX活性得：
S-NEX活性（U/g 土樣）= 0.15× x÷W×F =7.452 U/g 土樣。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC5720/BC5725 土壤酸性木聚糖酶（S-ACX）活性檢測試劑盒
BC5740/BC5745 土壤堿性木聚糖酶（S-BAX）活性檢測試劑盒
土壤中性木聚糖活性檢測試劑盒 微量法 土壤中性木聚糖活性檢測試劑盒 微量法
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