目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC5755-100T/96S細胞銅（Cu）含量檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
| 貨號 | BC5755 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 細胞銅（Cu）含量檢測 |
細胞銅（Cu）含量檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC5755
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體17 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 液體6 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1. 試劑一：若有試劑析出，置于37℃水浴溶解即可。
2. 標準品：10mmol/L（即10000nmol/mL）硫酸銅標準液。
3. 20nmol/mL標準品配制：將10000nmol/mL標準液用蒸餾水先稀釋為200nmol/mL的標準溶液，再將200nmol/mL標準液稀釋為20nmol/mL的標準液備用，具體稀釋可參考以下：取20µL 10000nmol/mL的標準液加入980µL蒸餾水混勻，即為200nmol/mL的標準品；再吸取100µL 200nmol/mL的標準液加入900µL蒸餾水混勻，即為20nmol/mL的標準品。
產(chǎn)品說明：
銅（Cu）是人體必需的微量元素之一，也是蛋白質以及酶的重要組成部分。可以存在于紅細胞的內外，主要功能是輔助造血，即催化血紅蛋白的合成。銅元素可以適當促進人體的骨骼發(fā)育，促進人體神經(jīng)系統(tǒng)以及腦部發(fā)育，維持嬰幼兒的正常生長發(fā)育，因此，測定細胞內銅離子含量可知體內是否缺銅。
在酸性條件下，Cu2+從銅藍蛋白和清蛋白中解離出來，與絡合劑3,5-二溴-PAESA反應，產(chǎn)生紫色絡合物，在580nm處有特征吸收峰，在一定范圍內吸光度與濃度成正比，從而計算出Cu2+濃度。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、微量玻璃比色皿/96孔板、可調式移液槍、細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
細胞的處理：收集細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細胞數(shù)量（106個）：蒸餾水體積（mL）為5~10：0.4的比例（建議5百萬細胞加入0.4mL蒸餾水），超聲波破碎細胞（冰浴，功率200W，超聲3s，間隔7s，共3min），然后10000g，4℃，離心10min，取上清置冰上待測。
二、測定步驟
1、 可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至580nm，分光光度計用蒸餾水調零。
2、 實驗前根據(jù)樣本量取部分試劑一37℃預熱10min。
3、 操作表：（在1.5mLEP管或96孔板中加入下列試劑）
試劑名稱（μL） | 空白管 | 測定管 | 標準管 |
蒸餾水 | 50 | - | - |
樣本 | - | 50 | - |
標準品 | - | - | 50 |
試劑一 | 110 | 110 | 110 |
試劑二 | 50 | 50 | 50 |
充分混勻，37℃孵育5min，取反應液于微量玻璃比色皿/96孔板中，立即測定580nm處吸光值A，記為A空白、A測定、A標準，計算ΔA測定=A測定-A空白，ΔA標準=A標準-A空白?？瞻坠?/span>和標準管只需測1-2次。 | |||
三、細胞銅（Cu）含量的計算
按細胞數(shù)量計算
細胞銅（Cu）含量（nmol/106 cell）= ΔA測定÷（ΔA標準÷C標準）×V提取÷N =8×ΔA測定÷ΔA標準÷N
按蛋白濃度計算：
細胞銅（Cu）含量（nmol/mg prot）= ΔA測定÷（ΔA標準÷C標準）×V提取÷（Cpr×V提?。?/span>
= 20×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr
C標準：標準品濃度，20nmol/mL；V提?。涸噭┮惑w積，0.4mL；N：細胞總數(shù)，以百萬計；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL。
注意事項：
1. 37℃孵育5min后請立即測定吸光度，若樣本數(shù)量過多，可分批次測定，盡量確保在20min內完成測定。
2. 如果樣本測定吸光值大于0.5，建議將樣本用蒸餾水稀釋后進行測定，注意同步修改計算公式。
3. 如果樣本測定吸光值小于0.005或接近空白管吸光值，可適當增大樣本量，空白管和標準管也需要進行相應調整。
實驗實例：
1. 收集約5百萬SHSY5Y細胞，加入0.4mL蒸餾水，超聲波破碎（功率 200w，超聲3s，間隔7s，共3min），10000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。之后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.152-0.092=0.060，ΔA標準=A標準-A空白=0.334-0.092=0.242，按細胞數(shù)量計算銅含量得：
細胞銅含量（nmol/106 cell）=8×ΔA測定÷ΔA標準÷N =0.3967 nmol/106 cell。
2. 收集約5百萬U937細胞，加入0.4mL蒸餾水，超聲波破碎（功率 200w，超聲3s，間隔7s，共3min），10000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。之后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA測定=A測定-A空白=0.122-0.092=0.030，ΔA標準=A標準-A空白=0.334-0.092=0.242，按細胞數(shù)量計算銅含量得：
細胞銅含量（nmol/106 cell）=8×ΔA測定÷ΔA標準÷N =0.1983 nmol/106 cell。
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