目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC4415-100T/48S土壤尿酸酶活性檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
| 貨號 | BC4415 | 應用領域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 土壤尿酸酶活性檢測 |
土壤尿酸酶活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC4415
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
試劑一 | 液體2 mL×1瓶（自備） | 2-8℃保存 |
試劑二A液 | 液體0.5 mL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑二B液 | 液體17.5 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體40 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑四 | 液體50 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、試劑一：自備甲苯；
2、試劑二：臨用前按照試劑二A液︰試劑二B液= 1︰35的比例混合，根據(jù)樣本量所需使用當天現(xiàn)配現(xiàn)用；
3、標準品：5 µmol/mL的尿酸溶液。
產(chǎn)品說明：
土壤尿酸酶是一種與核酸代謝有關的氧化還原酶，主要是將土壤中的核酸腺嘌呤與尿酸等物質(zhì)轉(zhuǎn)化成 素和尿囊酸，進而生成尿素供植物利用。
土壤尿酸酶能夠催化尿酸生成 素、CO2和H2O2，尿酸在284 nm有特征吸收峰，通過測定反應前后尿酸的減少量，來表示土壤尿酸酶活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、研缽、可調(diào)式移液器、微量石英比色/96孔UV板、冰、30~50目篩、甲苯（不允許快遞）和蒸餾水。
操作步驟：
一、 樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
新鮮土樣自然風干或37℃烘箱風干，過30~50目篩。
二、測定步驟
1、紫外分光光度計/酶標儀預熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長至284 nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零。
2、將5 µmol/mL標準溶液用蒸餾水倍比稀釋為1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625 µmol/mL標準溶液待用。
3、標準液稀釋可參考下表：
序號 | 稀釋前濃度（µmol/mL） | 標準液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（µmol/mL） |
1 | 5 | 100 | 400 | 1 |
2 | 1 | 200 | 200 | 0.5 |
3 | 0.5 | 200 | 200 | 0.25 |
4 | 0.25 | 200 | 200 | 0.125 |
5 | 0.125 | 200 | 200 | 0.0625 |
6 | 0.0625 | 200 | 200 | 0.03125 |
7 | 0.03125 | 200 | 200 | 0.015625 |
備注：實驗中每個標準管需60µL標準溶液。
4、加樣表：
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 | 無土管 | 標準管 | 空白管 |
風干土樣（g） | 0.05 | 0.05 | - | - | - |
試劑一（μL） | 12.5 | 12.5 | 12.5 | - | - |
充分振蕩，使土樣全部濕潤，室溫放置30 min。 | |||||
試劑二（μL） | 250 | - | 250 | - | - |
蒸餾水（μL） | 250 | 250 | 250 | - | - |
試劑三（μL） | 250 | 500 | 250 | - | - |
振蕩混勻，30℃恒溫培養(yǎng)24 h；10000 rpm，25℃，離心10 min，取上清。 | |||||
上清液（μL） | 60 | 60 | 60 | - | - |
標準液（μL） | - | - | - | 60 | - |
蒸餾水（μL） | - | - | - | - | 60 |
試劑四（μL） | 340 | 340 | 340 | 340 | 340 |
充分混勻，吸取200 μL于微量石英比色皿/96孔UV板中測定284 nm處吸光值，記為A測定管、A對照管、A無土管、A標準管和A空白管。計算ΔA=（A無土管-A空白管）-（A測定管-A對照管）、ΔA標準=A標準管-A空白管。每個測定管需設一個對照管，同一批次樣本檢測無土管、空白管只需檢測1-2管，標準曲線只需測1-2次。
三、土壤尿酸酶活性計算
1、 標準曲線的繪制：
根據(jù)標準管的濃度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA標準（y，ΔA標準），建立標準曲線。根據(jù)標準曲線，將ΔA測定（y，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x，μmol/mL）。
2、 土壤尿酸酶活性的計算：
酶活定義：每天每g土樣中消耗1 μmol的尿酸定義為一個酶活力單位。
土壤尿酸酶活力（U/g 土樣）＝x×V反總÷W÷T=0.7625x÷W
T：反應時間，1 d = 24 h；V反總：反應體系總體積：0.7625 mL；W：樣本質(zhì)量，g。
實驗實例：
1. 稱取兩管2-1-20號土樣0.05g，按照操作步驟進行操作，使用微量石英比色皿測得計算ΔA測定=（A無土管-空白管）-（A測定管-A對照管）=（1.0928-0.0023）-（0.6852-0.0509）=0.4562，帶入標準曲線y=1.6894x + 0.0016， 計算x=0.2691，按照計算公式計算酶活得：
土壤尿酸酶活力（U/g 土樣）=0.7625x÷W=0.7625×0.2691÷0.05=4.1 U/g 土樣。
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