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海藻糖酶（THL）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng)，請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說(shuō)明書操作。
貨號(hào)：BC2515
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：臨用前取1支加入0.6mL試劑一，充分溶解待用，用不完的試劑2-8℃保存1周；

2. 標(biāo)準(zhǔn)品：含10mg無(wú)水*萄糖（干燥失重<0.2%），臨用前加入1mL蒸餾水溶解，配制成10mg/mL標(biāo)準(zhǔn)液待用，4℃可保存2周，或者用飽和苯甲酸溶液溶解，2-8℃保存4周；

產(chǎn)品說(shuō)明：
THL（EC 3.2.1.28）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。海藻糖酶主要功能在于生物體分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供應(yīng)。
采用3,5－二硝基水楊酸法測(cè)定THL催化海藻糖產(chǎn)生的還原糖的含量。還原糖與3,5－二硝基水楊酸共熱生成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量和反應(yīng)液的顏色深度成正比，由此判斷THL活性的高低。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、超聲破碎儀、低溫離心機(jī)、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見(jiàn)“產(chǎn)品資料"附件
樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、細(xì)菌或細(xì)胞的處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液充分勻漿以破碎并裂解細(xì)胞，超聲波破碎，（冰浴，功率200W，超聲開(kāi)3秒，關(guān)10秒，重復(fù)30次）；8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、組織的處理：稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。8000g，4℃下離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
3、血清（漿）的處理：吸取約0.1mL血清（漿），加入0.9mL提取液，冰浴中勻漿。8000g，4℃下離心10min，
取上清，置冰上待測(cè)。

相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

1. Yan P, Wen C, Zhang S, et al. A toxicological, metabonomic and transcriptional analysis to investigate the property of mulberry 1-deoxynojirimycin against the growth of Samia cynthia ricini[J]. Pesticide biochemistry and physiology, 2018, 152: 45-54.

2. Jing Li,Yabing Duan,Chuanhong Bian,et al. Effects of validamycin in controlling Fusarium head blight caused by Fusarium graminearum: Inhibition of DON biosynthesis and induction of host resistance. Pesticide Biochemistry and Physiology. January 2019;153:152-160.(IF2.87)

3. Goddijn O J M, Verwoerd T C, Voogd E, et al. Inhibition of trehalase activity enhances trehalose accumulation in transgenic plants[J]. Plant physiology, 1997, 113(1): 181-190.

4. Küenzi M T, Fiechter A. Changes in carbohydrate composition and trehalase-activity during the budding cycle of Saccharomyces cerevisiae[J]. Archiv für Mikrobiologie, 1969, 64(4): 396-407.

參考文獻(xiàn)：
[1] Goddijn O J M, Verwoerd T C, Voogd E, et al. Inhibition of trehalase activity enhances trehalose accumulation in transgenic plants[J]. Plant physiology, 1997, 113(1): 181-190.
[2] Küenzi M T, Fiechter A. Changes in carbohydrate composition and trehalase-activity during the budding cycle of Saccharomyces cerevisiae[J]. Archiv für Mikrobiologie, 1969, 64(4): 396-407.

相關(guān)系列產(chǎn)品：
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