目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC4285-100T/96S纖維素（CLL）含量檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
| 貨號 | BC4285 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 纖維素(CLL)含量檢測 |
纖維素（CLL）含量檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC4285
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 提取液一 | 液體400 mL×1瓶（自備） | 2-8℃保存 |
| 提取液二 | 液體100 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 粉劑×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
提取液一：80%乙醇400 mL，即將320 mL無水乙醇和80 mL蒸餾水混合，自備。提供一個125 mL空瓶。
標準品：10 mg葡萄糖。臨用前加入1 mL蒸餾水溶解，配成10 mg/mL葡萄糖溶液備用，2-8℃保存兩周。
工作液的配制：取一瓶試劑一中加入2.5 mL試劑二，充分混勻，如較難溶解，可充分震蕩或加熱攪拌；用不完的試劑可以2-8℃保存一周。
產(chǎn)品說明：
纖維素是由β-D-葡萄糖單元以 β-1,4-糖苷鍵連接而成的直鏈多聚體，通常與半纖維素、果膠及木質(zhì)素結(jié)合在一起，是植物細胞壁的主要結(jié)構(gòu)成分。以纖維素為原料的產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于食品、造紙、塑料、電工及科研器材等領(lǐng)域。纖維素在酸性條件下加熱能分解成β-D-葡萄糖。在強酸作用條件下利用與蒽酮顯色劑測定纖維素含量。
技術(shù)指標：
低檢出限：0.0037 mg/mL
線性范圍：0.00391-0.3 mg/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式低溫離心機、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰盒、B酮、濃硫酸、無水乙醇、蒸餾水和EP管。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
細胞壁物質(zhì)（CWM）的提?。?/span>
稱取約0.3g（記為W1）樣本，加入1mL提取液一，室溫快速勻漿，90℃水浴20min，冷卻至室溫，6000g，25℃離心10min，棄上清。
沉淀先后用1.5mL提取液一和B酮各洗兩遍（渦旋振蕩2min左右，6000g，25℃離心10min，棄上清即可），沉淀即為粗細胞壁。
在粗細胞壁中加入1mL提取液二（去除淀粉）浸泡15小時，6000g，25℃離心10min，棄上清，將沉淀用蒸餾水清洗兩遍（渦旋振蕩2min左右，6000g，25℃離心10min，棄上清即可），之后干燥沉淀（60-100℃均可），得到細胞壁物質(zhì)（CWM），稱重記為W2。
纖維素的提?。?/span>
稱取烘干的CWM約 5mg（記為W3），加入0.5mL蒸餾水充分勻漿，勻漿液轉(zhuǎn)移至EP管中，用蒸餾水定容至0.5mL。
將定容后的勻漿液置于冰水混合物中，緩慢加入0.75mL濃硫酸，緩慢混勻，冰水浴中靜置30min。8000g，4℃離心10min，取上清液，用蒸餾水稀釋20倍后待測。
注意：1. 若樣本或者干燥后的沉淀質(zhì)地堅硬，可以先研碎再進行后續(xù)步驟
2. 在提取纖維素的過程中，首先，置于冰水浴中的EP管需要固定，不要上下左右浮動，一方面保障自身安全，另一方面防止冰水混合物進入EP管造成試驗誤差；再者，加入濃硫酸時，建議槍頭伸入樣本液面以下，緩慢加入，防止液面沸騰及樣本碳化。
二、測定步驟
分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至620nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零。
將10mg/mL 標準液用蒸餾水稀釋為0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.0078、0.0039mg/mL的標準溶液備用。
標準品稀釋表
| 序號 | 稀釋前濃度（mg/mL） | 標準液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（mg/mL） |
| 1 | 10 | 100 | 900 | 1 |
| 2 | 1 | 50 | 350 | 0.125 |
| 3 | 0.125 | 200 | 200 | 0.0625 |
| 4 | 0.0625 | 200 | 200 | 0.03125 |
| 5 | 0.03125 | 200 | 200 | 0.015625 |
| 6 | 0.015625 | 200 | 200 | 0.0078 |
| 7 | 0.0078 | 200 | 200 | 0.0039 |
實驗中每個標準管需150µL標準溶液。
操作表 (在1.5 mL離心管中) ：
| 試劑名稱（µL） | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
| 樣本 | 150 | - | - |
| 標準溶液 | - | 150 | - |
| 蒸餾水 | - | - | 150 |
| 工作液 | 35 | 35 | 35 |
| 濃硫酸 | 315 | 315 | 315 |
| 混勻，置95℃水浴10 min（蓋緊，防止水分散失），取出后冷卻至室溫，吸取200μL于96孔板中或者微量玻璃比色皿中測定620nm處吸光值A，分別記為A測定管，A標準管，A空白管。計算ΔA=A測定管-A空白管，ΔA標準=A標準管-A空白管（空白管及標準曲線均只需檢測1-2次）。 |
三、纖維素含量計算
1、標準曲線的繪制：
根據(jù)標準管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標準（y，ΔA標準），建立標準曲線。根據(jù)標準曲線，將ΔA（y，ΔA）帶入公式計算樣本濃度（x，mg/mL）
2、纖維素含量的計算：
（1）按樣本質(zhì)量計算
纖維素（mg/g 質(zhì)量）=x×V提取×20×（W2÷W3）÷W1÷1.11=22.52×x×W2÷W3÷W1
（2）按樣本細胞壁物質(zhì)（CWM）質(zhì)量計算
纖維素（mg/g 干重）=x×V提取×20÷W3÷1.11=22.52x÷W3
1.11：是此法測得葡萄糖含量換算為纖維素含量的常數(shù)，即111 µg葡萄糖用蒽酮試劑顯色相當于100 µg纖維素蒽酮試劑所顯示的顏色；V提?。豪w維素提取液體積，1.25 mL（0.5 mL蒸餾水+0.75 mL濃硫酸）；20：樣本稀釋倍數(shù)；W1：樣本質(zhì)量，0.3 g；W2：樣本細胞壁物質(zhì)（CWM）質(zhì)量，g；W3，提取纖維素時稱取的細胞壁物質(zhì)（CWM）質(zhì)量，g。
注意事項：
如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。
濃硫酸具有強腐蝕性，操作時各個步驟均需特別注意：纖維素提取在加入濃硫酸時，建議槍頭伸入樣本液面以下，緩慢加入，以防止液體飛濺燒傷；95℃水浴結(jié)束取出后需冷卻至室溫再打開EP管蓋，以防液體飛濺燒傷。
由于試劑二揮發(fā)性強且具有刺激性氣味，建議在通風(fēng)櫥中進行工作液的配制。
實驗實例：
取0.3g康乃馨葉片樣本提取細胞壁物質(zhì)（CWM）0.02g，稱取烘干的CWM約 5mg（記為W3），提取纖維素，取上清液，用蒸餾水稀釋20倍后進行檢測，用96孔板測得計算ΔA=A測定管-A空白管=0.538-0.061=0.477，標準曲線y=8.3536x+0.0388，計算x=0.05246，按樣本質(zhì)量計算得：
纖維素（mg/g 質(zhì)量）=22.52×x×W2÷W3÷W1=15.752 mg/g 質(zhì)量。
取0.3g黑麥草樣本提取細胞壁物質(zhì)（CWM）0.04g，稱取烘干的CWM約 5mg（記為W3），提取纖維素，取上清液，用蒸餾水稀釋20倍后進行檢測，用96孔板測得計算ΔA=A測定管-A空白管=0.666-0.061=0.605，標準曲線y=8.3536x+0.0388，計算x=0.06778，按樣本質(zhì)量計算得：
纖維素（mg/g 質(zhì)量）=22.52×x×W2÷W3÷W1=40.704 mg/g 質(zhì)量。
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC3330/BC3335 糖原合成酶（GCS）活性檢測試劑盒
BC3360/BC3365 UDPG焦磷酸化酶（UGP）活性檢測試劑盒
BC4440/BC4445 半纖維素含量檢測試劑盒
纖維素（CLL）含量檢測試劑盒 微量法 纖維素（CLL）含量檢測試劑盒 微量法
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