目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC2555-100T/48Sα-葡萄糖苷酶活性檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
| 貨號 | BC2555 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
| 主要用途 | 測定意義：α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì) |
α-葡萄糖苷酶（α-GC）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC2555
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體100 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 粉劑×2瓶 | -20℃保存 |
| 試劑二 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、試劑一：臨用前取1瓶加入6 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑建議-20℃分裝保存4周，避免反復(fù)凍融；
2、標(biāo)準(zhǔn)品：5 μmol/mL的對*溶液。
產(chǎn)品說明：
α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化水解芳基或烴基與糖基之間的α-糖苷鍵生成葡萄糖，不僅與細(xì)胞壁的松弛或加固有關(guān)，而且與細(xì)胞識別和一些信號分子產(chǎn)生密切相關(guān)。
α-GC分解對-硝 基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成對-*，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算α-GC活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、超聲破碎儀、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每1000萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率200W，超聲3秒，間隔10秒，重復(fù)30次），15000g，4℃，離心20min，取上清，置冰上待測。
2、組織的處理：稱取約0.2g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿；15000g，4℃，離心20min，取上清，置冰上待測。
3、液體樣本：直接檢測。若溶液有渾濁需離心后取上清進(jìn)行測定。
二、測定步驟
分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至400nm，分光光度計蒸餾水調(diào)零。
標(biāo)準(zhǔn)溶液的稀釋：將5μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水稀釋成100、50、25、12.5、6.25、0 nmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液待測。
標(biāo)準(zhǔn)液稀釋可參考下表：
| 序號 | 稀釋前濃度（nmol/mL） | 標(biāo)準(zhǔn)液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（nmol/mL） |
| 1 | 5000 | 100 | 400 | 1000 |
| 2 | 1000 | 200 | 1800 | 100 |
| 3 | 100 | 1000 | 1000 | 50 |
| 4 | 50 | 1000 | 1000 | 25 |
| 5 | 25 | 1000 | 1000 | 12.5 |
| 6 | 12.5 | 1000 | 1000 | 6.25 |
| 7 | 6.25 | 0 | 1000 | 0（空白管） |
備注：實驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需70µL標(biāo)準(zhǔn)溶液。
加樣表
| 試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | ||||||
| 試劑一 | 100 | ||||||||
| 試劑二 | 150 | 150 | |||||||
| 樣本 | 30 | 30 | |||||||
| 充分混勻，放入37℃水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱中準(zhǔn)確反應(yīng)30min后，立即放入沸水浴中煮沸5min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變） | |||||||||
| 試劑一 | 100 | ||||||||
| 充分混勻，8000g，4℃，離心5min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列試劑） | |||||||||
| 上清液 | 70 | 70 | |||||||
| 標(biāo)準(zhǔn)液 | 70 | ||||||||
| 試劑三 | 130 | 130 | 130 | ||||||
| 充分混勻，室溫靜置2min后，于400nm處測定吸光值A，分別記為A測定管、A對照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管。ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。每個測定管需設(shè)一個對照管。標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需測1-2次。 | |||||||||
參考文獻(xiàn)：
[1] Wang S Y, Camp M J, Ehlenfeldt M K. Antioxidant capacity and α-glucosidase inhibitory activity in peel and flesh of blueberry (Vaccinium spp.) cult ivars[J]. Food Chemistry, 2012, 132(4): 1759-1768.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0340/BC0345 糖原含量檢測試劑盒
BC0360/BC0365 β-1,3葡聚糖酶（β-1,3-GA）活性檢測試劑盒
BC2510/BC2515 海藻糖酶（THL）活性檢測試劑盒
α-葡萄糖苷酶活性檢測試劑盒 微量法 α-葡萄糖苷酶活性檢測試劑盒 微量法
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