目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC2255-100T/96S3-磷酸甘油酸激酶檢測試劑盒 微量法
CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
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分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 100T/96S |
貨號 | BC2255 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,化工,生物產業(yè),農業(yè) |
主要用途 | 測定意義:3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關鍵酶,廣泛存在于動植物和微生物體內,催化 |
3-磷酸甘油酸激酶(PGK)活
性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號:BC2255
規(guī)格:100T/96S
產品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致,有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體120 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 粉劑×1瓶 | -20℃保存 |
試劑三 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
試劑四 | 粉劑×1支 | -20℃保存 |
試劑五 | 粉劑×1瓶 | -20℃保存 |
溶液的配制:
試劑二:臨用前加入2.5 mL蒸餾水充分溶解后待用,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融;
試劑三:臨用前加入1 mL 蒸餾水充分溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融;
試劑四:臨用前加入1 mL 蒸餾水充分溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融;
試劑五:粉劑置于試劑瓶內棕色管中。臨用前加入4 mL 蒸餾水充分溶解,用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復凍融;
工作液的配制:按照蒸餾水:試劑一:試劑二:試劑三:試劑四:試劑五=6:10:2:1:1:4的體積比例充分混勻,現用現配。
產品說明:
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關鍵酶,也是生物得以生存的關鍵酶。廣泛存在于動植物和微生物體內,具有影響DNA復制和修補及刺激病毒RNA合成等生物學功能,廣泛應用于藥物靶標設計。
3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP產生1,3-二磷酸甘油酸和ADP,1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH作用下產生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸,引起340nm處的吸光度下降,即反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、低溫臺式離心機、水浴鍋、微量石英比色皿/96孔UV板、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟:具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項:
ΔA大于0.8或者A1測定小于0.9時(96孔UV板是當ΔA大于0.5或者A1測定小于0.6時),建議將粗酶液用提取液稀釋后再進行測定。當ΔA小于0.01時,可以延長反應時間(10min或15min)或增加樣本體積來測定。
空白管為檢測各試劑組分質量的檢測孔,正常情況下,變化不超過0.01。
樣本的蛋白濃度需自行測定,由于提取液中含有一定濃度的蛋白(約1mg/mL),所以測定樣本蛋白濃度時需扣除提取液自身蛋白濃度。
實驗實例:
取0.1g白菜加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清后再用提取液稀釋4倍,之后按照測定步驟操作,用微量石英比色皿測得計算ΔA測定管=A1測定-A2測定=1.05-0.5559=0.4941,ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.9966-0.9941=0.0025,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.4941-0.0025=0.4916,按樣本質量計算酶活得:PGK(U/g 質量)=321.54×ΔA÷W×稀釋倍數= 321.54×0.4916÷0.1×4=6322.7626 U/g 質量。
取0.1g小鼠肌肉加入1mL提取液進行勻漿研磨,取上清后再用提取液稀釋20倍,之后按照測定步驟操作,用微量石英比色皿測得計算,ΔA測定管=A1測定-A2測定=0.9327-0.4518=0.4809,ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.9966-0.9941=0.0025,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.4809-0.0025=0.4784,按樣本質量計算酶活得:PGK(U/g 質量)=321.54×ΔA÷W×稀釋倍數= 321.54×0.4784÷0.1×20=30764.9472 U/g 質量。
取駱駝血清樣本100μL按照測定步驟直接測定,用微量石英比色皿測得計算ΔA測定管=A1測定-A2測定= 1.0435-0.9793=0.0642,ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.9966-0.9941=0.0025,ΔA=ΔA測定管-ΔA空白管=0.0642-0.0025=0.0617,按液體體積計算酶活得:PGK(U/mL)=321.54×ΔA=321.54×0.0617=19.8390 U/mL。
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