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單脫氫抗壞血酸還
原酶（MDHAR）活性檢測試劑盒說明書
微量法
貨號：BC0655
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：
1、試劑二：臨用前加入2 mL蒸餾水充分溶解，2-8℃保存；
2、試劑三：臨用前加入3.33 mL蒸餾水充分溶解待用，可溶解后分裝-20℃保存，避免反復凍融；
3、試劑四：液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中。臨用前加2 mL試劑一充分溶解，可溶解后分裝-20℃保存，避免反復凍融。
產(chǎn)品說明：
MDHAR催化MDHA還原生成AsA，在抗壞血酸氧化還原代謝中具有重要作用。
MDHAR催化NADH還原MDHA生成AsA和NAD⁺，NADH在340 nm有特征吸收峰，但是NAD⁺沒有。通過測定340nm光吸收下降速率，來計算出MDHAR活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
研缽/勻漿器、冰、臺式離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔UV板、可調(diào)式移液槍和雙蒸水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
實驗實例：

1. 取0.1g橙子果肉加入1mL提取液進行冰浴勻漿。10000rpm，4℃離心10min，取上清置冰上，按照測定步驟操作，用微量石英比色皿測得計算ΔA測定管=A1測定-A2測定=0.8701-0.8396=0.0305，ΔA空白管=A1空白-A2空白=0.5515-0.5474=0.0041，按樣本質(zhì)量計算酶活得：MDHAR活性 (U/g 質(zhì)量) =0.268×(ΔA測定管-ΔA空白管)÷W=0.268×（0.0305-0.0041）÷0.1=0.070752 U/g 質(zhì)量。

注意事項：

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1. 
   

2. 當ΔA測定大于0.3時（96孔板ΔA測定大于0.2），建議客戶稀釋樣本或者調(diào)整試劑一和上清液的比例（如將400μL試劑一+300μL上清液改為600μL試劑一+100μL上清液）后進行測定。

3. 當ΔA測定過小時，建議客戶提高樣本量或者調(diào)整試劑一和上清液的比例（如將400μL試劑一+300μL上清液改為200μL試劑一+500μL上清液）。

4. 當A1大于1.5時（酶標儀測定時A1大于2時），建議將樣本稀釋進行測定。

5. 空白管為檢測各管試劑組份的檢測孔，正常情況下，其OD值在0.5左右（96孔板在0.3左右），變化不超過0.01。

6. 由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1mg/mL），所以在測定樣品蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。

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相關發(fā)表文獻：

1. Yali Zhou,Sufang Huo,Liting Wang,et al. Exogenous 24-Epibrassinolide alleviates oxidative damage from copper stress in grape (Vitis vinifera L.) cuttings. Plant Physiology and Biochemistry. September 2018;(IF3.404)

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