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羧酸酯酶（CarE）活性檢
測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC0845
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前取1瓶先加入1.25mL無水乙醇，震蕩使其大部分溶解，再加入8.75mL試劑三，震蕩至充分溶解，用不完的試劑2-8℃保存一周（1瓶粉劑溶解后可做100T，為了延長使用時間，此產(chǎn)品多給1瓶粉劑）；

2. 試劑二：臨用前取1瓶試劑二加入8 mL試劑三震蕩使其充分溶解，臨用前配制本試劑溶解后為淡黃色，且在常溫下不穩(wěn)定，建議根據(jù)樣本量取適當配好的試劑二置于冰上待用，剩余試劑分裝后置于-20℃保存一周，禁止反復凍融。

產(chǎn)品說明：
哺乳動物CarE，也稱脂族酯酶（aliesterase），廣泛分布于組織和器官，屬于絲*酸水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內(nèi)源性與外源性物質(zhì)水解，但不能催化水解乙酰膽*及其類似物。CarE參與脂質(zhì)運輸和代謝，并且與多種藥物、環(huán)境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關(guān)，有機磷農(nóng)藥可結(jié)合并且抑制CarE活性。
CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固藍顯色；在450nm光吸收增加速率，計算CarE活性。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、超聲破碎儀，蒸餾水，無水乙醇。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項：

1. 試劑二為-20℃儲存試劑，在常溫下不穩(wěn)定，一般常溫放置2-3小時即可明顯發(fā)現(xiàn)液體由淺黃色變?yōu)闇\褐色（液體變褐色視為變質(zhì)，不可用）。建議試驗前根據(jù)樣本量計算所需試劑二的用量，在試劑二溶解后，留取所需用量置于冰上待用，剩余試劑可分裝后-20℃儲存。

2. 動物組織樣本一般稀釋8倍或更大稀釋倍數(shù)后進行操作測定。

3. 當吸光值大于1時，建議將樣本稀釋后測量。計算公式注意乘以稀釋倍數(shù)。

4. 為保證反應時間的準確性，建議逐一比色；如想用96孔板對多樣本同時檢測，建議使用排槍，且一次最多8個或12個孔（8道排槍或12道排槍）。

實驗實例：

1. 取0.1g小鼠肝臟加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清用蒸餾水稀釋32倍后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA空白管=A2空-A1空=0.148-0.122=0.026，ΔA測定管=A2測-A1測=0.457-0.118=0.339，按樣本質(zhì)量計算酶活得：CarE酶活(U/g質(zhì)量)=8×(ΔA測定管-ΔA空白管)÷W×F=8×(0.339-0.026)÷0.1×32=801.28 U/g 質(zhì)量。

1. 取0.1g小鼠腎臟加入1mL提取液進行勻漿研磨，取上清用蒸餾水稀釋8倍后按照測定步驟操作，用96孔板測得計算ΔA空白管=A2空-A1空=0.148-0.122=0.026，ΔA測定管=A2測-A1測=0.28-0.124=0.156，按樣本質(zhì)量計算酶活得：CarE酶活(U/g質(zhì)量)=8×(ΔA測定管-ΔA空白管) ×F=8×(0.156-0.026)÷0.1×8=83.2 U/g 質(zhì)量。

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