目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC1455-100T/48S谷*酰胺酶(GLS)活性檢測試劑盒 微量法
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更新時(shí)間:2024-07-29 13:48:41瀏覽次數(shù):1034評(píng)價(jià)
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CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
---|---|---|---|
分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
貨號(hào) | 谷*酰胺酶(GLS)活性檢測試劑盒 微量法 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
主要用途 | 測定意義:GS(EC 6.3.1.2)主要存在于植物中,是生物體內(nèi)氨同化的關(guān)鍵酶 |
谷*酰胺酶(GLS)活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意:本產(chǎn)品試劑有所變動(dòng),請(qǐng)注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號(hào):BC1455
規(guī)格:100T/48S
產(chǎn)品組成:使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
提取液 | 液體70 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 粉劑×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑二A | 液體0.4 mL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑二B | 液體1.6 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑三 | 液體2 mL×1瓶 | 常溫保存 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制:
提取液:若試劑有結(jié)晶析出,可40℃加熱或者超聲溶解。
試劑一:臨用前加入5 mL提取液充分溶解待用;
試劑二B:臨用前將試劑二A倒入試劑二B中混勻(A:B=1:4比例),2-8℃保存4周;或者根據(jù)樣本量,按照體積比試劑二A:試劑二B=1:4現(xiàn)配現(xiàn)用;
標(biāo)準(zhǔn)品:10 μmol/mL 氮標(biāo)準(zhǔn)液。
1.25μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備:臨用前取125μL 10μmol/mL氮標(biāo)準(zhǔn)液和875μL提取液混合得1.25μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
產(chǎn)品說明:
谷*酰胺酶(L-glutamine amidohydrolase,EC3.5.1.2)主要存在于高等動(dòng)物和某些細(xì)菌以及植物根中,催化谷*酰胺水解成谷*酸和氨,在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用,尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝。
本試劑盒利用靛酚藍(lán)比色法測定GLS催化谷*酰胺生成的氨來計(jì)算其酶活性。
注意:實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品:
臺(tái)式離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和雙蒸水。
操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
一、樣本處理(可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量,具體比例可以參考文獻(xiàn))
組織:按照質(zhì)量(g):蒸餾水體積(mL)為 1:5-10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液),冰上勻漿后于4℃,12000g 離心15 min,取上清置于冰上待測。
細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500-1000:1的比例(建議500萬個(gè)細(xì)胞加入1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3s,間隔7s,總時(shí)間3min);然后4℃,12000g離心15min,取上清置于冰上待測。
液體樣本:直接檢測,若有渾濁可離心后測定。
二、測定步驟
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至630nm,分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。
根據(jù)樣本量取部分提取液和試劑一37℃預(yù)熱10min。
樣本測定:(在1.5mL EP管或96孔中加入下列試劑)
試劑名稱(µL) | 測定管 | 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 |
樣本 | 16 | 16 | - | - |
提取液 | - | 64 | - | 80 |
試劑一 | 64 | - | - | - |
混勻,37℃水浴1小時(shí) | - | - | ||
標(biāo)準(zhǔn)品 | - | - | 80 | - |
試劑二 | 16 | 16 | 16 | 16 |
試劑三 | 12 | 12 | 12 | 12 |
蒸餾水 | 92 | 92 | 92 | 92 |
混勻,常溫放置30min,630nm處讀取吸光值A,分別記為A測定管、A對(duì)照管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管,計(jì)算ΔA=A測定管-A對(duì)照管,ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測1-2次。
注意事項(xiàng):
當(dāng)ΔA大于0.8時(shí),建議將上清液用提取液進(jìn)一步稀釋后測量,計(jì)算時(shí)乘以稀釋倍數(shù)。
試劑二配置后盡快使用,若發(fā)現(xiàn)變色則不能再用。
相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn):
Fu Y, Lei F, Wang J, et al. Maternal Cigarette Smoke Exposure Disturbs Glutamate/GABA Balance in pFRG of Neonatal Rats[J]. Respiratory Physiology & Neurobiology, 2020: 103383.
Liu S, Li N, Lin Q, et al. Glutaminase 1 in mandarin fish Siniperca chuatsi: Molecular characterization, expression pattern and function involving in virus replication[J]. Aquaculture, 2020: 734924.
參考文獻(xiàn):
Mahajan R V, Saran S, Kameswaran K, et al. Efficient production of L-asparaginase from Bacillus licheniformis with low-glutaminase activity: optimization, scale up and acrylamide degradation studies[J]. Bioresource technology, 2012, 125: 11-16.
相關(guān)系列產(chǎn)品:
BC0080/BC0085 硝酸還原酶(NR)活性檢測試劑盒
BC1460/BC1465 谷*酸脫氫酶(GDH)活性檢測試劑盒
BC1480/BC1485 水土中亞硝酸鹽含量檢測試劑
谷*酰胺酶(GLS)活性檢測試劑盒 微量法 谷*酰胺酶(GLS)活性檢測試劑盒 微量法
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