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琥珀酸脫氫酶（SD
H）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC0955
規(guī)格：100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑二：為易揮發(fā)試劑，用完后盡快密封，-20℃保存；

產(chǎn)品說明：
SDH（EC 1.3.5.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。SDH是線粒體的一種標(biāo)志酶，位于線粒體內(nèi)膜上的一種膜結(jié)合酶，是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一。此外，為多種原核細(xì)胞產(chǎn)能的呼吸鏈提供電子。
SDH催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸（PMS）傳遞還原2,6-二 氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm處具有特征吸收峰，通過600nm吸光度的變化，測定2,6-DCPIP的還原速度，代表SDH酶活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件

注意事項：

1. 測定過程中所有試劑和樣本在冰上放置，以免變性失活。

2. 若ΔA大于0.5（比色皿）/0.3（96孔板），需將酶液用酶提取液稀釋，使ΔA小于0.5/0.3，可提高檢測靈敏度。注意同步修改計算公式。

3. 由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1mg/mL），所以在測定樣品蛋白濃度時需要減去提取液本身的蛋白含量。

實驗實例：

1. 取0.1g腎臟加入1mL試劑一和10μL試劑二，用冰浴勻漿器勻漿充分研磨，4℃11000g離心10min，取上清置冰上。按照測定步驟操作，用微量石英比色皿測得計算ΔA測定=A1測定-A2測定=0.7838-0.6414=0.1424，ΔA空白=A1空白-A2空白=1.019-1.019=0，按樣本質(zhì)量計算酶活得：

SDH活性（U/g 質(zhì)量）=961.905×（ΔA測定-ΔA空白）÷W=1369.75 U/g 質(zhì)量。
參考文獻(xiàn)：

1. Fattoretti P, Bertoni-Freddari C, Caselli U, et al. Impaired succinic dehydrogenase activity of rat Purkinje cell mitochondria during aging[J]. Mechanisms of ageing and development, 1998, 101(1-2): 175-182.

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