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DMEM培養(yǎng)基的使用方法及特點(diǎn)

閱讀:3747      發(fā)布時(shí)間:2016-6-3
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DMEM是一種含各種氨基酸和葡萄糖的培養(yǎng)基,高糖型有利于細(xì)胞停泊于一個(gè)位置生長(zhǎng),適于生長(zhǎng)較快、附著較困難腫瘤細(xì)胞等。該類培養(yǎng)基廣泛應(yīng)用于疫苗生產(chǎn)和各種初代病毒宿主細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)及單一細(xì)胞培養(yǎng);如A9、3T6、BALB/3T3、COS-1、COS-3、COS-7、L6、WEHI-3b等細(xì)胞系的培養(yǎng)。

DMEM培養(yǎng)基的成分

DMEM培養(yǎng)基

DMEM培養(yǎng)基的配制方法:

1 制備新鮮三蒸水或超純水。

2 稱取所需量的干粉培養(yǎng)基,加入約終體積一半的三蒸水中;若配制一個(gè)包裝的培養(yǎng)液,在將整個(gè)包裝的干粉倒入三蒸水后,需用水洗包裝袋內(nèi)面2次,倒入培養(yǎng)液中,以保證所有干粉都溶解成培養(yǎng)液。磁力攪拌或人工攪拌使之*溶解。

3 根據(jù)包裝袋上的要求補(bǔ)加所需量的碳酸氫鈉;根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要,添HEPES(5-20mmol/L)、谷氨酰胺和其他特殊物質(zhì)。

4 加水定容到終體積。

5 必要時(shí)用1 mol/L 鹽酸和1 mol/L 氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH。

6 用無(wú)菌0.22um濾膜過(guò)濾除菌,分裝于無(wú)菌血清瓶中,4℃冰箱保存。

配制好的培養(yǎng)液用前加入100U/mL青霉素和100U/mL鏈霉素,并根據(jù)需要加入血清(5%-20%)。

DMEM培養(yǎng)基的特點(diǎn):

(1)氨基酸含量為依格爾培養(yǎng)基的2倍,且含有非必需氨基酸,如甘氨酸等;

(2)維生素含量為依格爾培養(yǎng)基的4倍;

(3)含有糖酵解途徑中的重要物質(zhì)——丙酮酸;

(4)含有微量的鐵離子。

DMEM培養(yǎng)基應(yīng)用廣泛?;贒MEM培養(yǎng)基中氨基酸、微生物含量豐富,并具有糖酵解中的丙酮酸和微量Fe離子,因此在細(xì)胞培養(yǎng)、疫苗生產(chǎn)等方面的應(yīng)用為常見(jiàn)。

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