微生物培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。微生物培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長素以及水分等。另外,培養(yǎng)基還應(yīng)具有適宜的pH值、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位及合適的滲透壓。下面我們來介紹一下基本微生物培養(yǎng)基的配制方法。
微生物培養(yǎng)基的配制
溶化:
一般應(yīng)放在玻璃器皿或搪瓷齊內(nèi).加入蒸餾水,隔水加熱以促其溶解,加熱時(shí)應(yīng)經(jīng)常攪拌,防止焦結(jié),待其溶解后補(bǔ)足水分.
在使用干燥培養(yǎng)基時(shí),先將蒸餾水按定量加入容器中,然后稱取一定量培養(yǎng)基干粉放入水中,靜置10—15min,攪拌,振蕩,或延長時(shí)間以促進(jìn)溶解,一般不要熱,必要時(shí)加熱,但時(shí)間不宜過長,溫度不宜過高,避免某些營養(yǎng)成分被破壞.
校正酸堿度(調(diào)節(jié)pH):
培養(yǎng)基必須有適當(dāng)?shù)膒H.因此測定pH是培養(yǎng)基配制過程中的重要步驟之一,測定pH的標(biāo)準(zhǔn)溫度為25士2℃.調(diào)節(jié)pH可用無菌的1mol/l氫氧化鈉溶液或10%碳酸鈉溶液、1mol/l鹽酸溶液.當(dāng)調(diào)節(jié)緩沖液的pH時(shí),宜用6mol/l磷酸或10mol/l氫氧化鉀溶液.滅菌后的pH會(huì)比滅菌前的pH升高或降低,一般高壓滅菌前培養(yǎng)基的pH會(huì)比終pH調(diào)高0.2左右,滅菌后基本合適.因此對(duì)培養(yǎng)基、緩沖液、試劑在滅菌前后的pH均進(jìn)行測定,并記下每次pH的測定結(jié)果,有助于積累數(shù)據(jù)考察每種培養(yǎng)基、緩沖液、試劑對(duì)滅菌程序的耐受性,從而指導(dǎo)滅菌前pH的調(diào)節(jié).干燥培養(yǎng)基一般已校正過pH,用時(shí)也必須再驗(yàn)證.測定時(shí),一般用指示劑滴入培養(yǎng)基觀察其顏色的變化,或用pH計(jì)校正,如與所需pH不符,可用以上的酸或堿液加以校正.調(diào)整pH后要加熱過濾,使培養(yǎng)基澄清.
培養(yǎng)基的滅菌:
培養(yǎng)基的滅菌多采用高壓蒸汽滅菌,各種培養(yǎng)基的滅菌時(shí)間和壓力,按其成分不同而定.普通培養(yǎng)基采用121℃、103.42kPa滅菌15min,但容器和裝量較大時(shí),應(yīng)延長20min.含糖培養(yǎng)基115℃、68.85kPa滅菌30min.含糖、血清、雞蛋等培養(yǎng)基可用流動(dòng)蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min,連續(xù)3d,間歇滅菌.血清或組織液,采用低熱56—58水浴1h,連續(xù)5—6d滅菌,一些遇高溫即被破壞的物質(zhì)如尿素、腹水等,可用細(xì)菌過濾器,過濾除菌.高壓滅菌應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行,必須逐漸加熱,*排除滅菌器內(nèi)的空氣,再逐漸升壓保持預(yù)定的壓力和時(shí)間,達(dá)到全部殺滅微生物.以上的滅菌時(shí)間和溫度要經(jīng)過驗(yàn)證確認(rèn),如不同類型培養(yǎng)基混合一起滅菌時(shí)宜采用115℃、68.85kPa滅菌30min為好。
常見培養(yǎng)基的成分
1 .營養(yǎng)肉湯
成分:蛋白胨10g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,蒸餾水1000mL,pH7.4。
制法:按上述成分混合,溶解后校正pH,121℃高壓滅菌15min。
2.營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基
成分:蛋白胨10g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,瓊脂17g,蒸餾水1000mL,pH7.2。
制法:將除瓊脂外的各成分溶解于蒸餾水中,校正pH,加入瓊脂,分裝于燒瓶內(nèi),121℃,15min高壓滅菌備用。
3.MRS培養(yǎng)基
成分:蛋白胨10g,牛肉膏10g,酵母粉5g,K2HPO4??2g,檸檬酸二銨2g,乙酸鈉5g,葡萄糖20g,吐溫80 1mL,MgSO4 .7H2O 0.58g,MnSO4 4H2O 0.25g,(瓊脂15~20g),蒸餾水1000mL。
制法:將以上成分加入到蒸餾水中,加熱使*溶解,調(diào)pH6.2~6.4,分裝于三角瓶中,121℃,滅菌15min。
4.脫脂乳培養(yǎng)基
成分:牛奶,蒸餾水。
制法:將適量的牛奶加熱煮沸20~30min,冷卻,脂肪即可上浮。除去上層乳脂即得脫脂乳。將脫脂乳盛在試管及三角瓶中,封口后置于滅菌鍋中在108℃條件下蒸汽滅菌10~15min,即得脫脂乳培養(yǎng)基。
5.培養(yǎng)基A
成分:蛋白胨10.0g,酵母提取物1.0g,葡萄糖10.0g,NaCL5.0g,瓊脂15.0g,水1000mL。制法:將以上成分加入到蒸餾水中,加熱使*溶解,調(diào)pH7.0~7.2,分裝于三角瓶中,121℃,滅菌15min。
6.PTYG培養(yǎng)基
成分:胰胨Tryptone(Oxoid)5g,大豆蛋白胨5g,酵母粉(Oxoid)10g,葡萄糖10g,吐溫80 0 1mL,瓊脂15~20g,L-半胱氨酸鹽酸鹽0.05g,鹽溶液4mL。
制法:將以上成分加入到蒸餾水中,加熱使*溶解,調(diào)pH6.8~7.0,分裝于三角瓶中,115℃滅菌30min。
鹽溶液制備:無水氯化鈣0.2g,K2HPO4??1.0g,KH2PO4??1.0g,MgSO4 。7H2O 0.48g,NaCO3 10g,NaCL 2g,蒸餾水1000mL,溶解后備用。
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