瑞氏染色法是從經(jīng)典和常用的染色法。 是染料透入被染物并存留其內(nèi)部的一種過程,此過程既有物理的吸附作用,又有化學(xué)的親和作用,各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同,對各種染料的親和力也不一樣。因此,染色后同一血片上各種細(xì)胞可以染上各自特征性的顏色。 在瑞氏染色的過程中也有一些注意事項(xiàng)。
瑞氏染色的注意事項(xiàng)
1.血涂片干透后固定,否則細(xì)胞在染色過程中容易脫落。
2.沖洗時應(yīng)以流水沖洗,不能先倒掉染液,以防染料沉著在血涂片上。沖洗時間不能過久,以防脫色。如血涂片上有染料顆粒沉積,可滴加甲醇,然后立即用流水沖洗。
3.染色過淡可以復(fù)染,復(fù)染時應(yīng)先加緩沖液,然后加染液。染色過深可用流水沖洗或浸泡,也可用甲醇脫色。
4.瑞氏染色Ⅰ液由瑞氏染料、甲醇(AR級以上)和甘油組成,Ⅱ液為磷酸鹽緩沖液(pH6.4~pH6.8)。
5.由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì),所帶電荷隨溶液pH而定,在偏酸性環(huán)境中下正電荷增多,易與伊紅結(jié)合,染色偏紅;在偏堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多,易與美藍(lán)或天青結(jié)合,染色偏藍(lán)。
6. PH對細(xì)胞染色有影響。由于細(xì)胞中各種蛋白均為兩性電解質(zhì),所帶電荷隨溶液PH而定。對某一蛋白質(zhì)而言,如環(huán)境PH使用清潔中性的玻璃片,稀釋液必須用PH6.4~6.8的確良緩沖液。沖洗玻片必須用流水。
7.未干透的血膜不能染色,否則染色時血膜易脫落。
8.染色時間與染液濃度、染色溫度成反比;而與細(xì)胞數(shù)量成正比。
9.如血膜上有染料顆粒沉積,可加少許甲醇溶解,但需立即用水沖洗掉甲醇,以免脫色。
10. 染色過淡,可以復(fù)染。復(fù)染時應(yīng)先加緩沖液,創(chuàng)造良好的染色環(huán)境,而后加染液,或加染液與緩沖液的混合液,不可先加染液。
11.染色過深可用水沖洗或浸泡水中一定時間,也可用甲醇脫色。
12.染色偏酸或偏堿時,均應(yīng)更換緩沖液再重染。
以上為瑞士染色的注意事項(xiàng),由于瑞士染液系中性染料,又有緩沖液調(diào)節(jié)酸堿度,所以細(xì)胞受染后,藍(lán)紅等顏色都較適中,核染質(zhì)、胞漿及其中之顆粒顯色較為清楚。
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