細(xì)胞凋亡是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同,細(xì)胞凋亡不是一件被動(dòng)的過(guò)程,而是主動(dòng)過(guò)程,它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用;它并不是病理?xiàng)l件下,自體損傷的一種現(xiàn)象,而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動(dòng)爭(zhēng)取的一種死亡過(guò)程。細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),就像樹(shù)葉或花的自然凋落一樣,對(duì)于這種生物學(xué)觀察,借臘“Apoptosis”來(lái)表示,意思是像樹(shù)葉或花的自然凋落,可譯為細(xì)胞凋亡。
其實(shí)從嚴(yán)格的詞學(xué)意義上來(lái)說(shuō),細(xì)胞程序性死亡與細(xì)胞凋亡是有很大區(qū)別的。細(xì)胞程序性死亡的概念是1956年提出的,PCD是個(gè)功能性概念,描述在一個(gè)多細(xì)胞生物體中某些細(xì)胞死亡是個(gè)體發(fā)育中的一個(gè)預(yù)定的,并受到嚴(yán)格程序控制的正常組成部分。例如蝌蚪變成青蛙,其變化過(guò)程中尾部的消失伴隨大量細(xì)胞死亡,高等哺乳類動(dòng)物指間蹼的消失、顎融合、視網(wǎng)膜發(fā)育以及免疫系統(tǒng)的正常發(fā)育都必須有細(xì)胞死亡的參與。這些在機(jī)體發(fā)育過(guò)程中出現(xiàn)的細(xì)胞死亡有一個(gè)共同特征:即散在的、逐個(gè)地從正常組織中死亡和消失,機(jī)體無(wú)炎癥反應(yīng),而且對(duì)整個(gè)機(jī)體的發(fā)育是有利和必須的。因此認(rèn)為動(dòng)物發(fā)育過(guò)程中存在的細(xì)胞程序性死亡是一個(gè)發(fā)育學(xué)概念,而細(xì)胞凋亡則是一個(gè)形態(tài)學(xué)的概念,描述一件有著一整套形態(tài)學(xué)特征的與壞死*不同的細(xì)胞死亡形式。但是一般認(rèn)為凋亡和程序性死亡兩個(gè)概念可以交互使用,具有同等意義。
雖然凋亡與壞死的終結(jié)果極為相似,但它們的過(guò)程與表現(xiàn)卻有很大差別。壞死是細(xì)胞受到強(qiáng)烈理化或生物因素作用引起細(xì)胞無(wú)序變化的死亡過(guò)程。表現(xiàn)為細(xì)胞 脹大,胞膜破裂,細(xì)胞內(nèi)容物外溢,核變化較慢,DNA降解不充分,引起局部嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)。凋亡是細(xì)胞對(duì)環(huán)境的生理性病理性刺激信號(hào),環(huán)境條件的變化或緩和性損傷產(chǎn)生的應(yīng)答有序變化的死亡過(guò)程。其細(xì)胞及組織的變化與壞死有明顯的不同。
那么問(wèn)題來(lái)了,為什么有Hoechst呢?那先來(lái)了解一下。
Hoechst(B8030-Solarbio)是一類DNA染料。讀音hoaxt(類似于‘赫克斯特’),初由?HoechstAG公司發(fā)明。這是一家德國(guó)公司,創(chuàng)建于1863年,后來(lái)經(jīng)過(guò)數(shù)次合并,變成了Sanofi-Aventis(賽諾菲)集團(tuán)的子公司。Hoechst與DNA雙鏈中的小溝(minor groove)結(jié)合,更傾向與于富含A/T(腺嘌呤/胸腺嘧啶)的DNA鏈。雖然說(shuō)它能與所有的核酸結(jié)合,但是富含AT的雙鏈DNA使熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)。Hoechst可穿過(guò)細(xì)胞膜,可結(jié)合于活細(xì)胞或固定過(guò)的細(xì)胞。因此可用于活細(xì)胞標(biāo)記。
因?yàn)閔oechst能夠染活細(xì)胞,所以在一般性的細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)中,基本所有的細(xì)胞都能染色,只是染色的深淺不一,活細(xì)胞呈現(xiàn)正常均勻的藍(lán)色,而凋亡細(xì)胞因?yàn)榧?xì)胞核發(fā)生了皺縮變成了致密濃染,會(huì)有點(diǎn)發(fā)白。所以hoechst與細(xì)胞凋亡就有聯(lián)系了。
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