品牌:Solarbio | 貨號(hào):R0010
別名 | 蛋白提取試劑盒 |
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英文名稱(chēng) | RIPA buffer(high) |
儲(chǔ)存條件 | 本產(chǎn)品配有一支 PMSF(0.3ml/1.5ml) PMSF-20℃保存,裂解液4℃。有效期1年 |
外觀(guān)(性狀) | 黃色澄清液體 |
單位 | 瓶 |
本品為組織細(xì)胞裂解液。主要用于從動(dòng)物組織和動(dòng)物細(xì)胞中抽取的可溶性蛋白。組織活細(xì)胞本產(chǎn)品配有一支PMSF(0.3ml/1.5ml),PMSF請(qǐng)于-20℃保存。
使用說(shuō)明
如發(fā)現(xiàn)RIPA有沉淀,請(qǐng)放室溫半小時(shí)或者常溫水浴使沉淀溶解。
根據(jù)使用量,取每1ml RIPA 加入10ul PMSF,使PMSF的終濃度為1mM?;靹騻溆?(PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加)。
1、樣品前處理:
a)對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。
b)對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50-100萬(wàn)細(xì)胞/管,然后再裂解。
c)對(duì)于組織樣品: 把組織剪切成細(xì)小的碎片。按照每20mg組織加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量)。
用玻璃勻漿器勻漿,直充分裂解。
2、后處理:
將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
注意事項(xiàng) :
本試劑為強(qiáng)烈型裂解液,可以提取核蛋白,但在提取核蛋白的同時(shí),也會(huì)將基因組一并釋放出來(lái),造成細(xì)胞裂解液粘稠,此時(shí)可以直接加入蛋白上樣緩沖液,煮沸再離心,離心后直接上樣電泳;若想測(cè)定濃度,可入加少量 SDS(1%),煮沸后離心測(cè)濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑,所以不適合使用Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒,請(qǐng)選擇BCA法或者Lowry法檢測(cè)蛋白濃度。
如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過(guò)超聲處理打碎打散粘稠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
相關(guān)產(chǎn)品:
P1020 1×PBS,PH7.2-7.4,0.01M
R0020 RIPA 組織細(xì)胞裂解液 R0030 非變性組織細(xì)胞裂解液
P1015 4×蛋白上樣緩沖液(含 DTT)
PC0020 BCA 法蛋白濃度測(cè)定試劑盒
PC0030 Lowry 法蛋白濃度測(cè)定試劑盒
P1300 SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒
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