奧林巴斯生物顯微鏡的掃描電鏡標(biāo)本制備方法

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 奧林巴斯生物顯微鏡——掃描電鏡標(biāo)本制備方法

奧林巴斯生物顯微鏡與透射電鏡一樣，掃描電鏡標(biāo)本也是在真空中進(jìn)行觀察，因此必須干燥，而且干燥后樣品表面不變形。這是對(duì)樣品的第二個(gè)要求。生物樣品含水較多，干燥后容易皺紹。因此，在掃描電鏡標(biāo)本制備中有些特殊的干燥方法。

觀察時(shí)，奧林巴斯生物顯微鏡電子束在樣品表面逐點(diǎn)掃描。一般情況下，入射電子數(shù)多于從樣品表面發(fā)出納電子數(shù)，因而便有電子在樣品上聚集，如標(biāo)本不導(dǎo)電，則聚集的電子將會(huì)放電產(chǎn)生干擾信號(hào)。生物組織多由低原子序數(shù)的碳、氫、氧、氮等元素組成，導(dǎo)電性差而電阻較高。因此，對(duì)掃描電鏡標(biāo)本的第三個(gè)要求是樣品導(dǎo)電。為此，又需做特殊的處理。

奧林巴斯生物顯微鏡掃描電鍍是用來觀察樣品表面的結(jié)構(gòu)。二次電子象反映了樣品表面的形貌。因此對(duì)掃描電鏡標(biāo)本的*個(gè)要求是把待觀察的表面完整無損的暴露出來，固定好。

下面奧林巴斯生物顯微鏡就這三方面要求分別加以介紹。

奧林巴斯生物顯微鏡掃描電鎊觀察的表面一般是組織或器官的自然表面，如呼吸邏，消化道，泌尿及生殖管道的上皮表面。機(jī)體中分散細(xì)胞的自然表面以及骨胳等硬組織的自然面等。取材時(shí)，對(duì)于待觀察的部分要保護(hù)好，切勿用器械觸碰。如果上面粘有分泌物，粘濃或糞塊等污物，必須在固定前去除，以免遮蓋表面微紉結(jié)構(gòu)，清除的方法一般是用溫生理鹽水或緩沖液沖洗或噴射沖洗，硬組織可用超聲波（低頻）清洗。有的實(shí)驗(yàn)室用蛋白酶類清洗表面的粘液，但必須注意，蛋白酶不僅可除去表面粘附物，也可破壞樣品表面的蛋白質(zhì)。對(duì)于分散細(xì)胞表面的處理參見另一節(jié)。需特別提出的是，暴露出的表面需要清洗，但保存標(biāo)本的原則與透射電鏡標(biāo)本*相同；如動(dòng)物處死方法，取材速度及要求樣品中斷血液供應(yīng)后1—2分鐘內(nèi)進(jìn)入團(tuán)定液等。與透射電鏡標(biāo)本*不同的一點(diǎn)是樣品體積可大些。由子樣品臺(tái)較大，景深較深，掃描電鏡樣品塊可在10mm見方，5mm高的范圍。

奧林巴斯生物顯微鏡電鍍標(biāo)本必須干燥。我們觀察樣品是觀察細(xì)胞表面的原貌，富有微細(xì)結(jié)構(gòu)的樣品表面往往經(jīng)過脫水及干燥后（特別是空氣中干燥后）發(fā)生嚴(yán)重變形。原因是液價(jià)（特別是水）的表面張力破壞了微紉結(jié)構(gòu)。雖然有些可揮發(fā)介質(zhì)如乙醇或丙圍的表面張力較小，但對(duì)類如氣管上皮表面纖毛這樣的細(xì)微結(jié)構(gòu)仍有損傷。因此，自?shī)W林巴斯生物顯微鏡掃描電鏡問世后，雖然不少學(xué)者擬用于觀察生物樣品，就是因?yàn)檫^不好“干燥"這一關(guān)而未曾得到好的生物軟組織的掃描電鍍照片。自從1969年開始使用臨界點(diǎn)于操法（c眾tcal—p01nNvln8method）后，將掃描電鏡的生物樣品制備大大推進(jìn)了一步。目前世界上電鏡實(shí)驗(yàn)室多應(yīng)用臨界點(diǎn)干燥法與冷凍干燥法對(duì)掃描電鏡進(jìn)行干燥。