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親和層析蛋白純化系統(tǒng)層析方法步驟
閱讀：3058 發(fā)布時(shí)間：2015-11-4
親和層析蛋白純化系統(tǒng)層析法
親和層析蛋白純化系統(tǒng)使用前才添加成10 mM β-mercaptoethanol.
Buffer B-300/20: Buffer B-300/0 加有20 mM imidazole
Buffer B-300/250: Buffer B-300/0 加有250 mM imidazole
親和層析蛋白純化系統(tǒng)方法步驟：
1、親和層析膠體1mL已經(jīng)裝填在管柱內(nèi)，成為一淡藍(lán)色膠柱。請(qǐng)把管柱架直在鐵架上，去除下方的填塞物，用bufferB-300/0流洗20mL后塞住出口，準(zhǔn)備注入樣本。
2、除去膠面上方的緩沖液，并取出樣本(IEX)使其回到室溫，慢慢用滴管加到親和膠體上，小心勿弄亂膠體表面；讓樣本沒入膠體中，同時(shí)收集流出液每管2.5mL。
3、待樣本全部進(jìn)入膠體后，關(guān)閉出口，再慢慢加入bufferB-300/20,打開出口收集流出液；bufferB-300/20共流洗30mL。
4、接著以bufferB-300/250流洗30mL,方法同上，收集。
5、所有收集均定量蛋白質(zhì)并測(cè)定酶活性，取收集酶活性zui高的數(shù)個(gè)，共得多少mL(AF)，保留100μL以供分析。