在單細(xì)胞水平上，通過光鏡定性檢測(cè)細(xì)胞凋亡。

• 敏感：細(xì)胞凋亡（細(xì)胞染色）標(biāo)簽的大強(qiáng)度高于缺口翻譯方法
• 快速：使用熒光的dUTP允許后直接TUNEL反應(yīng)，但在此之前的二次檢測(cè)系統(tǒng)除了對(duì)樣品的分析
• 方便：直接標(biāo)記程序，使用熒光素-dUTP標(biāo)記允許在檢測(cè)過程中的TUNEL反應(yīng)效率的核查
• 準(zhǔn)確：在分子水平（DNA鏈斷裂）和細(xì)胞凋亡的早期階段的細(xì)胞識(shí)別凋亡鑒定
• 靈活：無基板;提供了選擇的機(jī)會(huì)，選擇染色過程

樣品材料：細(xì)胞離心涂片和細(xì)胞涂片準(zhǔn)備，在幻燈片上生長(zhǎng)的貼壁細(xì)胞，冷凍和石蠟包埋的組織切片。

廣泛使用的方法，以確定細(xì)胞凋亡的基因組DNA的瓊脂糖凝膠電泳和DNA段分析基于分析3 H -胸苷，另外，5 -溴-2'-脫氧尿苷。該方法涉及從零散，低分子量的DNA不分段，高分子量的DNA分離在一個(gè)特定的細(xì)胞群。因此，這些方法并不在一個(gè)特定的細(xì)胞群提供單個(gè)細(xì)胞的命運(yùn)的信息，特別是在組織切片。另外，個(gè)別細(xì)胞凋亡可能顯微鏡確認(rèn)，因?yàn)楹巳旧|(zhì)凝聚和碎裂的外觀特征，但這種方法是主觀的，不限于一個(gè)相對(duì)狹窄的時(shí)間窗口時(shí)的形態(tài)學(xué)變化大的是細(xì)胞凋亡的特點(diǎn)是DNA降解，這是有選擇性的DNA鏈接的internucleosomal地區(qū)處于早期階段。可能產(chǎn)生DNA斷裂雙鏈和單鏈DNA斷裂（尼克斯）。兩種類型的休息可以自由3'-OH末端修飾核苷酸標(biāo)記（例如在酶催化反應(yīng)，生物素-dUTP標(biāo)記，地高辛-dUTP標(biāo)記，熒光的dUTP）檢測(cè)。末端轉(zhuǎn)移酶（TDT）催化脫氧模板獨(dú)立聚合單和雙鏈DNA的3'-末端。這種方法也被稱為TUNEL法（牛逼 ð ü DT-介導(dǎo)的TP-X的列印 ICK é ND 升abeling）。另外，自由3'-OH基團(tuán)，可使用DNA聚合酶標(biāo)記通過名為尼克翻譯的模板依賴的機(jī)制。然而，TUNEL法被認(rèn)為是更敏感和更快捷。

1. 酶液（TDT），5瓶
2. 標(biāo)簽解決方案（熒光的dUTP），5瓶
3. 轉(zhuǎn)換器AP（反熒光抗體AP），準(zhǔn)備使用的

在原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒，AP是基于檢測(cè)單和雙鏈DNA斷裂，細(xì)胞凋亡的早期階段發(fā)生的
細(xì)胞凋亡是固定的，透。隨后，細(xì)胞培養(yǎng)與TUNEL反應(yīng)混合物，其中包含TDT和熒光的dUTP。在此潛伏期，末端轉(zhuǎn)移酶催化熒光的dUTP除了免費(fèi)單和雙鏈DNA的3'-OH組。洗滌后，記者酶堿性磷酸酶共軛反熒光抗體標(biāo)記的DNA受損部位納入標(biāo)簽。洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物后，AP保留在免疫復(fù)合物是由底物反應(yīng)的可視化。

圖1： 示意圖顯示喔那些點(diǎn)點(diǎn)滴滴在原位細(xì)胞死亡檢測(cè)試劑盒，AP和POD 的原則