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檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒 常量可見分光光度法 說(shuō)明 技術(shù) 文章

閱讀:2119      發(fā)布時(shí)間:2019-4-2
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檸檬酸合酶(Citrate Synthase,CS)試劑盒

商品貨號(hào):QS1005
英文名稱:Citrate Synthase(CS)Assay Kit
別名:檸檬酸合酶試劑盒 CS Kit 檸檬酸合酶(CS)試劑盒 檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒,生化法試劑盒
檢測(cè)方法:常量法

 

商品貨號(hào):商品品牌:規(guī)格基本售價(jià)選擇規(guī)格
QS1005-25管/24樣 25管/24樣¥2000.00元 
QS1005-50管/48樣 50管/48樣¥3200.00元 

測(cè)定意義:                           

CS(EC 2.3.3.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,是三羧酸循環(huán)個(gè)限速酶,是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點(diǎn)之一。

測(cè)定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰輔酶A,進(jìn)一步水解產(chǎn)生檸檬酸;該反應(yīng)促使無(wú)色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

 

貨號(hào): QS1005-50                                          規(guī)格:50管/48樣

檸檬酸合酶(citrate synthase,CS)試劑盒說(shuō)明書

分光光度法

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:                          

CSEC 2.3.3.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體基質(zhì)中,是三羧酸循環(huán)個(gè)限速酶,是三羧酸循環(huán)主要調(diào)控位點(diǎn)之一。

測(cè)定原理:

CS催化乙酰CoA和草酰乙酸產(chǎn)生檸檬酰輔酶A,進(jìn)一步水解產(chǎn)生檸檬酸;該反應(yīng)促使無(wú)色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,在 412nm處有特征吸光值。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、無(wú)水乙醇和蒸餾水

試劑組成和配制:

試劑一:液體50mL×1 瓶,-20保存;

試劑二:液體10mL×1 瓶,-20保存;

試劑三:液體1mL×1 支,-20保存;

試劑四:液體50mL×1 瓶,4保存;

試劑五:粉劑×2 支,4保存,臨用前加入800μL 無(wú)水乙醇,用不完的試劑4保存一周;

試劑六:粉劑×4 支,-20保存,臨用前加入400μL 蒸餾水,用不完的試劑仍-20保存;

試劑七:粉劑×2 支,-20保存,臨用前加入800μL 蒸餾水,用不完的試劑仍-20保存;

  •  

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

  1. 稱取約0.1g 組織或收集500萬(wàn)細(xì)胞,加入1mL 試劑一和10uL 試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
  2. 將勻漿600g,4離心5min
  3. 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4離心10min
  4. 上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的CS(此步可選做)。
  5. 在步驟(4)中的沉淀中加入200uL 試劑二和2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3 秒,間隔10 秒,重復(fù)30 次),用于線粒體CS 測(cè)定。
  6.  
  1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至412nm,蒸餾水調(diào)零。
  2. 將試劑四、五、六和七在37(哺乳動(dòng)物)或25(其它物種)孵育5min。
  3. 樣本測(cè)定

試劑名稱(μL

測(cè)定管

試劑四

780

試劑五

30

試劑六

30

樣本

30

試劑七

30

將上述試劑按順序加入1 mL 玻璃比色皿中,加試劑七的同時(shí)開始計(jì)時(shí),在412nm 波長(zhǎng)下記錄20 秒時(shí)的初始吸光度A1 和反應(yīng)2min 后的吸光值A2,計(jì)算ΔA=A2-A1

CS 活性計(jì)算:

  1. 按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB 定義為一個(gè)酶活力單位。

CSnmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反總÷ε×d×109]÷(V ×Cpr) ÷T=1100×ΔA÷Cpr此法需要自行測(cè)定樣本蛋白質(zhì)濃度。

  1. 按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每g 組織每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB 定義為一個(gè)酶活力單位。

CSnmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷ε×d×109W× V ÷V 樣總)÷T=222.2×ΔA÷W

  1. 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1 nmol TNB 定義為一個(gè)酶活力單位。

CSnmol/min /104 cell=[ΔA×V 反總÷ε×d×109500×V ÷V 樣總)÷T=0.4444×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,9×10-4 L;εTNB 摩爾消光系數(shù),1.36×104 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.03 mL;V 樣總:加入提取液體積,0.202 mL;T:反應(yīng)時(shí)間,2 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500 萬(wàn)。

 

輔酶Ⅰ系列    
QS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒可見分光光度法50管/24樣500
MS1000輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒微量法100管/48樣920
QS1001乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒可見分光光度法50管/24樣170
MS1001乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒微量法100管/48樣330
QS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1002NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)測(cè)試盒微量法100管/96樣550
QS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣320
MS1003NADP-蘋果酸脫氫酶(NADP-MDH)測(cè)試盒微量法100管/96樣600
QS1004NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒  可見分光光度法50管/48樣450
MS1004NADH氧化酶(NOX)測(cè)試盒  微量法100管/96樣850
QS1005-50檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒可見分光光度法50管/48樣3200
QS1005-25檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒可見分光光度法25管/24樣2000
MS1005檸檬酸合酶(CS)測(cè)試盒微量法100管/48樣3500
QS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣720
MS1006丙酮酸脫羧酶(PDC)測(cè)試盒微量法100管/96樣1400
QS1007醇脫氫酶(ADH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣280
MS1007醇脫氫酶(ADH)測(cè)試盒微量法100管/96樣550
QS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣800
MS1008單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測(cè)試盒微量法100管/96樣1550
QS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒紫外分光光度法50管/48樣420
MS1009乙醛脫氫酶(ALDH)測(cè)試盒微量法100管/96樣800
QS1010NAD激酶(NADK)測(cè)試盒可見分光光度法50管/48樣600
MS1010NAD激酶(NADK)測(cè)試盒微量法100管/48樣1100
QS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒   紫外分光光度法25管/24樣1280
MS1011線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH-輔酶Q還原酶測(cè)試盒   微量法100管/96樣2500

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