Rat Corticosterone（CORT）
ELISA Kit
 
 
 
Catalog No. CSB-E07014r
（96T）
 
 
 
 
 
  This  immunoassay  kit  allows  for  the  in  vitro  quantitative  determination  of  rat
CORT concentrations in serum, plasma and other biological fluids.
  Expiration date      six months from the date of manufacture
  FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.
 
 
 
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PRINCIPLE OF THE ASSAY
The  microtiter  plate  provided  in  this  kit  has  been  pre-coated  with  an
goat-anti-rabbit  antibody.  Standards  or  samples  are  then  added  to  the
appropriate  microtiter  plate  wells  with  a  HRP-conjugated  CORT  and
antibody  preparation  specific  for  CORT  and  incubated.  Then  substrate
solutions  are  added  to  each  well.  The  enzyme-substrate  reaction  is
terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change
is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm ± 2 nm. The
concentration of CORT in the samples is then determined by comparing the
O.D. of the samples to the standard curve.
DETECTION RANGE
0.16  ng/ml-40  ng/ml.  The  standard  curve  concentrations  used  for  the
ELISA’s were 40 ng/ml, 10 ng/ml,2.5 ng/ml, 0.62 ng/ml, 0.16ng/ml.
SPECIFICITY
This  assay  recognizes  recombinant  and  natural  rat CORT. No  significant
cross-reactivity or interference was observed.
SENSITIVITY
The minimum detectable dose of rat    CORT is typically less than 0.1 ng/ml.
The sensitivity of this assay, or Lower Limit of Detection （LLD） was defined
as the lowest protein concentration that could be differentiated from zero. 
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MATERIALS PROVIDED
Reagent      Quantity
Assay plate  1
Standards （S1-S5）  5 x 0.5 ml  
HRP-conjugate  1 x 6 ml
Antibody    1 x 6 ml
Wash Buffer      
1 x 15 ml
  （20×concentrate）
Substrate A  1 x 7 ml
Substrate B  1 x 7 ml
Stop Solution      1 x 7 ml
Standard  S 1  S 2  S 3  S 4  S 5
Concentration
（ng/ml）
0.16  0.62  2.5  10  40
STORAGE
1.  Unopened  test  kits  should  be  stored  at  2-8°C  upon  receipt  and  the
microtiter plate should be kept in a sealed bag. The test kit may be used
throughout the expiration date of the kit. Refer  to  the package  label for
the expiration date.
2.  Opened  test  kits  will  remain  stable  until  the  expiring  date  shown,
provided it is stored as prescribed above.    
3.  A  microtiter  plate  reader  with  a  bandwidth  of  10  nm  or  less  and  an
optical  density  range  of  0-3  OD  or  greater  at  450nm  wavelength  is
acceptable for use in absorbance measurement. 
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TECHNICAL HINTS
1.  Bring all reagents and plate to room temperature for at least 30 minutes
before use. Unused wells need store at 2-8℃and avoid sunlight.
2.  Wash Buffer    If crystals have formed in the concentrate, warm to room
temperature and mix gently until the crystals have compley dissolved.
Dilute 15 ml of Wash Buffer Concentrate into deionized or distilled water
to prepare 300 ml of Wash Buffer.
3.  To avoid cross-contamination, change pipette tips between additions of
each  standard  level, between  sample additions, and between  reagent
additions. Also, use separate reservoirs for each reagent.
4.  When  using  an  automated  plate  washer,  adding  a  30  second  soak
period following the addition of wash buffer, and/or rotating the plate 180
degrees between wash steps may improve assay precision.
5.  To  ensure  accurate  results,  proper  adhesion  of  plate  sealers  during
incubation steps is necessary. Sealers can not be reused.
6.  Substrate  Solution  should  remain  colorless  until  added  to  the  plate.
Keep Substrate Solution protected from light. Substrate Solution should
change from colorless to gradations of blue.
7.  Stop Solution  should  be  added  to  the  plate  in  the  same  order  as  the
Substrate Solution. The color developed in the wells will turn from blue
to  yellow  upon  addition  of  the  Stop  Solution. Wells  that  are  green  in
color  indicate  that  the Stop Solution has not mixed  thoroughly with  the
Substrate Solution.
Precaution: The Stop Solution provided with  this kit  is an acid solution. Wear
eye, hand, face, and clothing protection when using this material. 
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OTHER SUPPLIES REQUIRED
  Microplate  reader  capable  of measuring  absorbance  at  450  nm, with
the correction wavelength set at 540 nm or 570 nm.
  Pipettes and pipette tips.
  Deionized or distilled water.
  Squirt bottle, manifold dispenser, or automated microplate washer.
SAMPLE COLLECTION AND STORAGE
  Serum    Use a serum separator  tube （SST） and allow samples  to clot
for 30 minutes before centrifugation for 15 minutes at 1000 x g. Remove
serum and assay  immediay or aliquot and store samples at  -20° C.
Avoid repeated freeze-thaw cycles.
  Plasma    Collect  plasma  using  citrate,  EDTA,  or  heparin  as  an
anticoagulant. Centrifuge for 15 minutes at 1000 g within 30 minutes of
collection. Assay  immediay  or  aliquot  and  store  samples  at  -20°C.
Avoid repeated freeze-thaw cycles.
Note: Grossly hemolyzed samples are not suitable for use in this assay.
ASSAY PROCEDURE
Bring all reagents and samples to room temperature before use. It is
recommended that all samples, standards, and controls be assayed in duplicate.
1.  Set a Blank well without any solution. Add 50µl of Standard or Sample
per well. Standards need test in duplicate.   
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2.  Add 50µl of HRP-conjugate  to each well （not  to Blank well）,  then add
50µl Antibody  to each well. Mix well and  then  incubate  for 1 hour at
37°C.  
3.  Fill each well with Wash Buffer （about 200µl）, stay for 10 seconds and
Spinning.  Repeat  the  process  for  a  total  of  three  washes.  Complete
removal of  liquid at each step  is essential  to good performance. After
the  last  wash,  remove  any  remaining Wash  Buffer  by  aspirating  or
decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.
4.  Add  50µl  of  Substrate  A  and  Substrate  B  to  each  well,  mix  well.
Incubate  for 15 minutes at 37°C. Keeping  the plate  away  from drafts
and other temperature fluctuations in the dark.
5.  Add  50µl  of  Stop  Solution  to  each  well.  If  color  change  does  not
appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.
6.  Determine  the optical density of each well within 10 minutes, using a
microplate reader set to 450 nm.
CALCULATION OF RESULTS
Average  the duplicate readings  for each standard, Blank, and sample and
subtract  the optical density of Blank. Create a standard curve by reducing
the data using computer software capable of generating a  four parameter
logistic  （4-PL）  curve-fit. As  an  alternative,  construct  a  standard  curve  by
plotting  the mean absorbance  for each standard on  the x-axis against  the
concentration on the y-axis and draw a best fit curve through the points on
the  graph.  The  data may  be  linearized  by  plotting  the  log  of  the  CORT 
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concentrations  versus  the  log  of  the  O.D.  and  the  best  fit  line  can  be
determined  by  regression  analysis.  This  procedure  will  produce  an
adequate but less precise fit of the data. If samples have been diluted, the
concentration  read  from  the  standard  curve  must  be  multiplied  by  the
dilution factor.
LIMITATIONS OF THE PROCEDURE
  The kit should not be used beyond the expiration date on the kit label.
  Do not mix or substitute reagents with those from other lots or sources.
  It is important that the Calibrator Diluent selected for the standard curve
be consistent with the samples being assayed.
  If samples generate values higher than the highest standard, dilute the
samples with the appropriate Calibrator Diluent and repeat the assay.
  Any  variation  in  Standard  Diluent,  operator,  pipetting  technique,
washing  technique,  incubation  time  or  temperature,  and  kit  age  can
cause variation in binding.
  This assay  is designed  to eliminate  interference by soluble  receptors,
binding proteins, and other  factors present  in biological samples. Until
all  factors  have  been  tested  in  the  Immunoassay,  the  possibility  of
interference cannot be excluded.
 
 
 
 
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大 大大 大鼠 鼠鼠 鼠皮質 皮質 皮質 皮質酮 酮酮 酮（CORT）快速檢測試劑盒 快速檢測試劑盒 快速檢測試劑盒 快速檢測試劑盒
使用說明書 使用說明書 使用說明書 使用說明書
本試劑盒僅供研究使用 本試劑盒僅供研究使用 本試劑盒僅供研究使用 本試劑盒僅供研究使用
產(chǎn)品編號 產(chǎn)品編號 產(chǎn)品編號 產(chǎn)品編號：CSB-E07014r
檢測范圍 檢測范圍 檢測范圍 檢測范圍： ：： ：0.16ng /ml -40 ng /ml
zui低檢測限 zui低檢測限 zui低檢測限 zui低檢測限： ：： ：0.1 ng/ml
特異性 特異性 特異性 特異性： ：： ：本試劑盒可同時檢測天然或重組的 CORT，且與其他相關蛋白基
本無交叉反應。
有效期 有效期 有效期 有效期：6 個月（2-8℃避光保存）
預期應用 預期應用 預期應用 預期應用： ：： ：ELISA 法定量測定大鼠血清，血漿及其它相關生物液體中
CORT 含量。
說明 說明 說明 說明  
1.  濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。  
2.  剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正?，F(xiàn)象，不會對實
驗結果造成任何影響。
實驗原理 實驗原理 實驗原理 實驗原理
采用競爭酶聯(lián)免疫法檢測 CORT 含量。首先用羊抗兔包被微孔板，制備
成固相二抗，然后加入待測標本、辣根過氧化物酶標記 CORT 以及抗 CORT
抗體，使之形成包被二抗-抗 CORT 抗體- CORT（HRP）復合物。經(jīng)顯色后
在酶標儀測定吸光值（OD值），通過計算機或作圖擬合濃度-吸光度曲線，反
算出待測標本中 CORT 含量。 
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試劑盒組成及試劑配制 試劑盒組成及試劑配制 試劑盒組成及試劑配制 試劑盒組成及試劑配制  
1.  酶聯(lián)板 酶聯(lián)板 酶聯(lián)板 酶聯(lián)板（Assay plate ）：                                                              一塊 （96孔）。   
2.  標準品 標準品 標準品 標準品 （Standard）：                                                                     5×0.5ml/瓶。 
Standard 1  Standard 2  Standard 3  Standard 4  Standard 5
0.16ng/ml  0.62ng/ml  2.5ng/ml  10ng/ml  40ng/ml
3.  酶結合物 酶結合物 酶結合物 酶結合物（ （（ （HRP-conjugate） ）） ）：                                                      1×6ml/瓶。 
4.  抗體 抗體 抗體 抗體（ （（ （Antibody） ）） ）                                                                            1×6ml/瓶。 
5.  顯色劑 顯色劑 顯色劑 顯色劑 A （ （（ （Substrate A）： ）： ）： ）：                                                               1×7ml/瓶。 
6.  顯色劑 顯色劑 顯色劑 顯色劑 B （ （（ （Substrate B）： ）： ）： ）：                                                               1×7ml/瓶。 
7.  濃洗滌液 濃洗滌液 濃洗滌液 濃洗滌液（ （（ （Wash Buffer） ）） ）  1×15ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋 20 倍。   
8.  終止液 終止液 終止液 終止液（ （（ （Stop Solution） ）） ）：                                                              1×7ml/瓶。 
需要而未提供的試劑和器材 需要而未提供的試劑和器材 需要而未提供的試劑和器材 需要而未提供的試劑和器材
1.  標準規(guī)格酶標儀
2.  高速離心機
3.  電熱恒溫培養(yǎng)箱
4.  干凈的試管和 Eppendof 管
5.  系列可調節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器
6.  蒸餾水，容量瓶等
標本的采集及保存 標本的采集及保存 標本的采集及保存 標本的采集及保存
1.  血清：全血標本請于室溫放置 2 小時或 4℃過夜后于 1000 x g離心 20 分
鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍
融。
2.  血漿：可用 EDTA 或肝素作為抗凝劑，標本采集后 30 分鐘內于 2 - 8° C
1000 x g離心 15 分鐘，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但應避免反復
凍融。
注 注注 注： ：： ：以上標本置 以上標本置 以上標本置 以上標本置 4℃ ℃℃ ℃保存應小于 保存應小于 保存應小于 保存應小于 1 周 周周 周， ，， ，-20℃ ℃℃ ℃或 或或 或-80℃ ℃℃ ℃均應密封保存 均應密封保存 均應密封保存 均應密封保存， ，， ，-20℃ ℃℃ ℃不應超過 不應超過 不應超過 不應超過 1 個 個個 個
月 月月 月， ，， ，-80℃ ℃℃ ℃不應超過 不應超過 不應超過 不應超過 2 個月 個月 個月 個月； ；； ；標本溶血會影響zui后檢測結果 標本溶血會影響zui后檢測結果 標本溶血會影響zui后檢測結果 標本溶血會影響zui后檢測結果， ，， ，因此溶血標本不宜進行 因此溶血標本不宜進行 因此溶血標本不宜進行 因此溶血標本不宜進行檢 檢檢 檢
測 測測 測。 。。 。 
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操作步驟 操作步驟 操作步驟 操作步驟
1.  將各種試劑至室溫〔18-25℃〕平衡半小時，取濃縮洗滌液，根據(jù)當批檢
測數(shù)量，用蒸餾水上 1：20 稀釋，混勻后備用。
2.  將酶標板取出，設一個空白對照孔、不加任何液體；每個標準點依次各設
兩孔，每孔加入相應標準品 50ul；其余每個檢測孔直接加待測標本 50ul。   
3.  每孔加入酶結合物 50ul（空白對照孔除外），再按同樣的順序加入抗體
50ul，充分混勻，貼上不干膠封片，置 37℃溫育 1 小時。
4.  手工洗板，棄去孔內液體。洗滌液注滿各孔，靜置 10 秒甩干，重復三次
后拍干；洗板機洗板，選擇洗滌三次程序，洗板后拍干。
5.  每孔加顯色劑 A 液 50µl，顯色劑 B 液 50µl，振蕩混勻后，37℃避光顯色
15 分鐘，每孔加終止液 50µl。
6.  用酶標儀讀數(shù)，取波長 450nm，先用空白孔調零點，然后測定各孔 OD
值。
數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)處理
1.  手工作圖：用雙對數(shù)坐標紙，以標準品濃度為縱軸，以對應的 0D值為橫
軸，畫出平滑曲線或直線，在曲線上按照待測血清 OD值找到對應的濃度
值。
2.  計算機：使用線性擬合功能，應將標準品 S1-S5 的濃度取對數(shù)（Log（濃
度））作為 X，將對應的 OD值減去空白對照孔 OD值后取對數(shù)（Log（OD
值-NSB））作為 Y，進行線性擬合。再從擬合線上計算出待測血清濃度。
注意事項 注意事項 注意事項 注意事項
1.  從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒內全部瓶裝試劑及所需預包被板條應置室溫
2.  （18-25℃）平衡30 分鐘后方可使用，余者應及時封好口，放回 2-8℃中
避光保存，以備后用。
3.  使用前試劑應搖勻。
4.  結果判斷須在反應終止后 10 分鐘內完成。
5.  不同批號的試劑不可混用。
6.  加樣時應注意避免所用各試劑及樣品之間的交又污染。
7.  操作時，試劑盒內每種試劑各使用一個吸頭，每一種標準品使用一個吸頭，
每一個樣品各使用一個吸頭，吸頭一次性使用。