YO-PRO-1/PI細(xì)胞凋亡與壞死檢測(cè)試劑盒(Apoptosis and Necrosis Detection Kit with YO-PRO-1and PI)，簡(jiǎn)稱YP1/PI細(xì)胞凋亡與壞死檢測(cè)試劑盒，是一種基于DNA綠色熒光染料YO-PRO-1 (YP1)和紅色熒光染料碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)的雙熒光法檢測(cè)細(xì)胞凋亡和壞死的試劑盒。本試劑盒適用于熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀及其它熒光檢測(cè)系統(tǒng)。

YO-PRO-1，又名惡唑黃(Oxazole yellow)，簡(jiǎn)稱YP1，是一種對(duì)正常動(dòng)物細(xì)胞膜沒有通透性而對(duì)于凋亡細(xì)胞的細(xì)胞膜有通透性的DNA綠色熒光染料，常用于細(xì)胞凋亡的檢測(cè)。YO-PRO-1是一種非細(xì)胞膜穿透性的并對(duì)DNA具有高親和力的羰花青單體綠色熒光染料，在沒有與DNA結(jié)合的時(shí)候基本上沒有熒光，而與DNA結(jié)合后可以發(fā)出明亮的綠色熒光。在細(xì)胞凋亡發(fā)生時(shí)，細(xì)胞膜通透性發(fā)生改變，此時(shí)YO-PRO-1可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與DNA結(jié)合，發(fā)出明亮的綠色熒光，因此常使用本熒光染料用于分析和鑒定凋亡細(xì)胞。需要注意的是YO-PRO-1也能染色壞死細(xì)胞，因此需要和對(duì)壞死細(xì)胞特異性熒光染色的PI進(jìn)行雙染才能有效判定細(xì)胞凋亡。

PI，即碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種核酸紅色熒光染料，只能染色細(xì)胞膜完整性喪失的壞死細(xì)胞，并與核酸結(jié)合發(fā)出明亮的紅色熒光。因此， YO-PRO-1與碘化丙啶(PI)聯(lián)合使用，可以同時(shí)進(jìn)行凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞的檢測(cè)，凋亡細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光，壞死細(xì)胞同時(shí)呈現(xiàn)紅色和綠色熒光陽性，活細(xì)胞很少或幾乎沒有熒光。

細(xì)胞死亡包括凋亡(apoptosis)、壞死(necrosis)、焦亡(pyroptosis)等多種形式。其中受調(diào)控的細(xì)胞死亡被稱為程序性細(xì)胞死亡(programmed cell death, PCD)。程序性細(xì)胞死亡包括凋亡、細(xì)胞程序性壞死(programmed necrosis)或壞死性凋亡(necroptosis)和焦亡等。從細(xì)胞膜的完整性角度來看，凋亡的特征是細(xì)胞膜的完整性會(huì)保留，而壞死的特征是細(xì)胞膜的完整性會(huì)喪失。

細(xì)胞凋亡是生物體發(fā)育等生命過程中普遍存在的、由基因決定的細(xì)胞主動(dòng)有序的死亡方式。當(dāng)細(xì)胞遇到內(nèi)、外環(huán)境因子刺激時(shí)，啟動(dòng)基因調(diào)控的保護(hù)措施，去除體內(nèi)非必需細(xì)胞或即將發(fā)生特化的細(xì)胞。在這一過程中，細(xì)胞脫落離體或裂解為若干凋亡小體，并迅速被巨噬細(xì)胞或鄰近細(xì)胞清除，不會(huì)導(dǎo)致炎癥反應(yīng)，這是一種由基因控制、高度有序的細(xì)胞自主死亡，包含一系列信號(hào)事件組成的通路。細(xì)胞凋亡的主要特征包括細(xì)胞膜保持完整、細(xì)胞膜磷脂酰絲氨/酸外翻(Annexin V染色陽性)、基因組DNA片段化(DNA fragmentation) (即產(chǎn)生DNA ladder并且TUNEL染色陽性)、電鏡或熒光染色時(shí)細(xì)胞核碎裂或致密濃染、Caspase 3等激活、線粒體膜電位下降從線粒體內(nèi)釋放等。

壞死通常被認(rèn)為是一種偶發(fā)性的并且是被動(dòng)的細(xì)胞死亡，如物理性或化學(xué)性的損害因素及缺氧與營(yíng)養(yǎng)不良等都可以導(dǎo)致細(xì)胞壞死。壞死細(xì)胞初期細(xì)胞膜通透性增高，致使細(xì)胞腫脹，細(xì)胞器變形或腫大，早期細(xì)胞核無明顯形態(tài)學(xué)變化，最后細(xì)胞破裂，細(xì)胞膜喪失完整性，釋放出細(xì)胞內(nèi)容物，并常引起炎癥反應(yīng)，但不會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞凋亡或自噬標(biāo)志物。通常，凋亡對(duì)生命體是有利的，而壞死很可能是有害甚至是致命的。凋亡的晚期也可以發(fā)生繼發(fā)性壞死(secondary necrosis)。受細(xì)胞程序性調(diào)控的壞死(programmed necrosis)被稱為necropotosis。

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