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水質(zhì)微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
點(diǎn)擊次數(shù):1690 發(fā)布時(shí)間:2014-3-6
通過(guò)本試驗(yàn),了解食品檢驗(yàn)中水質(zhì)微生物檢測(cè)的基本方法。
一、水樣的采集
1.自來(lái)水
先將水用清潔布拭干,并用攝子夾消毒棉花沾酒精灼燒水3min滅菌,再打開(kāi)水使水流5min后,以滅菌的三角瓶或生理鹽水瓶接取水樣,以待檢測(cè)。
2.池水、河水或湖水
應(yīng)取距水面10~15cm的深層水,先將滅菌的帶塞的玻璃瓶瓶口向下浸入水中,然后翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái),除去瓶塞,水即流入瓶中,盛滿后,將瓶塞塞好,再?gòu)乃腥〕觯⒓礄z驗(yàn),否則需放入冰箱保藏。
二、細(xì)菌菌落總數(shù)測(cè)定(SPC)
1.樣品稀釋與制備
(1)自來(lái)水:用滅菌吸管吸取1mL 水樣,注入滅菌的培養(yǎng)皿中,共做兩個(gè)平皿。然后倒入約15 mL已溶化并冷卻至45℃左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,并輕輕搖晃,使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。待冷卻后倒置于36±1℃培養(yǎng)24h,進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。
(2)池水、河水或湖水等:用無(wú)菌吸管吸取檢測(cè)水樣1mL于*支9mL生理鹽水試管中,搖勻,再?gòu)牡?/span>1支稀釋試管中吸取1mL于第2支生理鹽水的試管中,如此類推,做成一系列的稀釋液。一般稀釋度可選擇為10-1、10-2、10-3、10-4,若水樣混濁或污染嚴(yán)重的可再進(jìn)一步稀釋至適宜稀釋度。自zui后三個(gè)稀釋度的試管中各吸取1mL稀釋液于培養(yǎng)皿中,每稀釋度做二個(gè)平皿,傾注入約15mL 已溶化并冷卻至45℃左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂,并輕晃平皿,使之混勻,待冷卻后倒置于36±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h?!?/span>
2.菌落計(jì)數(shù)方法
待平皿培養(yǎng)24h長(zhǎng)出菌落后作平皿菌落計(jì)數(shù),可用肉眼觀察,必要時(shí)用放大鏡檢查,以防遺漏,在記下各皿的菌落數(shù)后,求出同稀釋度的2個(gè)平皿的平均菌落數(shù)。
3.菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告:
①平皿菌落數(shù)的選擇:選取菌落數(shù)在30~300之間的平皿作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn),一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平皿應(yīng)采用其平均數(shù),其中一個(gè)平皿有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí),則不宜采用,而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平皿作為該稀釋度的菌落數(shù),若片狀菌落不到平皿的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,則可計(jì)算半個(gè)平皿后乘2以代表全皿菌落數(shù)。
②稀釋度的選擇:
a.應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30~300之間的稀釋度,乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表例1)。
b.若有兩個(gè)稀釋度,其生長(zhǎng)之菌落數(shù)均在30~300之間,則應(yīng)視二者之比如何來(lái)決定,若其比值小于2,應(yīng)報(bào)告其平均數(shù):若大于2則報(bào)告其中較小的數(shù)字(見(jiàn)表例2及3)。
c.若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300,則應(yīng)按稀釋度zui高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表例4)
d.若所有釋稀度的平均菌落數(shù)均小于30,則應(yīng)按稀釋倍數(shù)zui低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表例5)。
e.若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30~300之間,其中一部分大于300或小于30時(shí),則以zui接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表例6)。
f.若所有稀釋度均無(wú)菌落生長(zhǎng),則以小于(<)1乘以zui低稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表例7)。
細(xì)菌菌落總數(shù)計(jì)算方法(SPC法)
例次 | 不同稀釋度平均CFU | 兩稀釋度 CFU之比 | 菌落總數(shù)報(bào)告 CFU/mL(g) | 備 注 | ||
10-1 | 10-2 | 10-3 | ||||
1 | 1356 | 164 | 20 | - | 16400或1.6X104 | 兩位以后的數(shù)字采用四舍五入的方法去舍。 |
2 | 2760 | 295 | 46 | 1.6 | 37750或3.8X104 | |
3 | 2890 | 271 | 60 | 2.2 | 27100或2.7X104 | |
4 | <3000 | 1650 | 513 | - | 513000或5.1X105 | |
5 | 27 | 11 | 5 | - | 270或2.7X102 | |
6 | 無(wú)法計(jì)數(shù) | 305 | 12 | - | 30500或3.5X104 | |
7 | 0 | 0 | 0 |
| <10 |
|
③菌落數(shù)的報(bào)告:菌落數(shù)小于10,按<10報(bào)告;在100以內(nèi)時(shí),按其實(shí)有數(shù)報(bào)告;大于100時(shí),采用二位有效數(shù)字,在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值,以四舍五入方法計(jì)算,為了縮短數(shù)字后面的零數(shù),也可用10的指數(shù)來(lái)表示。
三、大腸菌群檢驗(yàn):
大腸菌群系指一群在36±1℃24h能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣,需氧和兼性厭氧G-無(wú)芽孢桿菌,包括埃希氏大腸桿菌、克雷伯氏菌、陰溝腸桿菌和檸檬酸桿菌等。該菌群主要來(lái)源于人畜糞便,故以此作為糞便污染指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)水質(zhì)的衛(wèi)生質(zhì)量,具有廣泛的衛(wèi)生學(xué)意義。
水中大腸菌群數(shù)系以每1L水樣中大腸菌群zui近似數(shù)(M.P.N)個(gè)表示。
瓶裝水、飲用水、水源水和游泳池水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
水 源 | 大腸菌群 (個(gè)/L) | CFU/mL | |
瓶裝水(礦泉水、純凈水) | <2 | <50 | |
飲用(自來(lái))水 | <2 | <100 | |
水源水 | 準(zhǔn)備加氯消毒后供飲用的水 | ≤1000 |
|
準(zhǔn)備凈化處理及加氯消毒后供飲用的水 | ≤10000 |
| |
游泳池水 | <100 | <1000 |
- 生活飲用水或食品廠生產(chǎn)用水的檢驗(yàn):
(1)初步發(fā)酵試驗(yàn)
在2個(gè)各裝有50mL 叁倍濃縮的十二烷基硫酸鈉乳糖蛋白胨發(fā)酵管中,各加入100 mL水樣,將10支含有5mL叁倍乳糖蛋白胨發(fā)酵管中各加入10mL水樣,于36±1℃培養(yǎng)24h,24h未產(chǎn)氣者繼續(xù)培養(yǎng)至48h。若水質(zhì)條件變化不大的飲用水(或生產(chǎn)用水)可采用3個(gè)裝有50mL 叁倍濃縮的十二烷基硫酸鈉乳糖蛋白胨發(fā)酵管分別加入100mL 水樣。
(2)分離培養(yǎng)
將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別接種在伊紅美蘭瓊脂平板,置36±1℃培養(yǎng)18~24h,然后取出,觀察菌落形態(tài),凡菌落或菌苔符合深紫黑色,有金屬光澤;紫黑色,不帶或略帶金屬光澤;淡紫紅色,中心顏色較深或紫紅色菌落特征的均應(yīng)進(jìn)一步作革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。
(3)證實(shí)試驗(yàn)
在上述平板上,挑取在此平板生長(zhǎng)符合上述特征的菌落,或可疑無(wú)法判斷的菌落1~2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色,同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管,置36±1℃培養(yǎng)24±2h,觀察產(chǎn)氣情況,凡乳糖發(fā)酵管產(chǎn)氣,革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽孢桿菌,即可報(bào)告為大腸菌群陽(yáng)性;如乳糖發(fā)酵管不產(chǎn)氣或革蘭氏染色陽(yáng)性,則報(bào)告為大腸菌群陰性。
(4)根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù),查下列表。
飲用水大腸菌群檢索表(接種水樣總量300mL,其中100mL2份,10mL10份)
100mL水樣陽(yáng)性管數(shù) 10mL水樣陽(yáng)性管數(shù) | 0 | 1 | 2 |
個(gè)/L | 個(gè)/L | 個(gè)/L | |
0 | <3 | 4 | 11 |
1 | 3 | 8 | 18 |
2 | 7 | 13 | 27 |
3 | 11 | 18 | 38 |
4 | 14 | 24 | 52 |
5 | 18 | 30 | 70 |
6 | 22 | 36 | 92 |
7 | 27 | 43 | 120 |
8 | 31 | 51 | 161 |
9 | 36 | 60 | 230 |
10 | 40 | 69 | >230 |
大腸菌群變異不大的飲用水檢索表
陽(yáng)性管數(shù) | 0 | 1 | 2 | 3 | 接種水樣總量300mL( 3份100mL) |
1L水樣中大腸菌群數(shù) | <3 | 4 | 11 | >18 |
2.池水、河水或湖水等水源水的檢驗(yàn)
將水樣稀釋成10-1、10-2。分別吸取1mL的 10-1、10-2的稀釋水樣和1mL原水樣,各注入裝有10mL單料乳糖蛋白胨發(fā)酵管中,另取10mL原水樣注入裝有5mL叁倍十二烷基硫酸鈉乳糖蛋白胨發(fā)酵管中(接種水量為11.11mL,若水源水嚴(yán)重污染則取樣量應(yīng)為1.111mL,即原水樣、10-1、10-2、10-3;若污染輕度水取樣為111.1mL,即100倍原水樣、10倍原水樣、原水樣和10-1)。置36±1℃培養(yǎng)24±2h,觀察產(chǎn)氣情況,若有產(chǎn)氣者則按上述的分離培養(yǎng)與證實(shí)試驗(yàn)進(jìn)行,zui后根據(jù)產(chǎn)氣管數(shù)查表報(bào)告。
四、培養(yǎng)基配方
(1)生理鹽水 NaCl 9g 水 1000mL
(2)伊紅美蘭培養(yǎng)基(EMB)
蛋白胨水瓊脂培養(yǎng)基 100mL (蛋白胨 10g NaCl 5g 瓊脂20g 水1000mL pH7.6 121℃20min)
乳糖 2g 2%伊紅液 2mL 0.65%美蘭液 1mL
將已滅菌的蛋白胨水瓊脂溶化,冷卻至60℃左右時(shí),按無(wú)菌操作加入乳糖、伊紅液和美蘭液(這三種應(yīng)分別在115℃滅菌20min),搖勻后倒平板。
(3)乳糖發(fā)酵液(供復(fù)發(fā)酵用)
蛋白胨 10g 乳糖 5g NaCl 5g 水 1000mL pH7.4
- 營(yíng)養(yǎng)瓊脂
蛋白胨 10g 牛肉膏 3g NaCl 5g 瓊脂 20g 水 1000mL pH7.0-7.2 121℃ 20min。
(5)單料十二烷基硫酸鈉乳糖發(fā)酵液配方:
蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 乳糖 5 g NaCl 5g
1.6%溴甲酚紫乙醇液 1mL 十二烷基硫酸鈉 0.1g
水 1000mL pH7.2~7.4
將上述除指示劑外溶于水,調(diào)pH7.2~7.4,再加入指示劑。
(6)叁料十二烷基硫酸鈉乳糖發(fā)酵液配方:
按單料十二烷基硫酸鈉乳糖發(fā)酵液配方要求各營(yíng)養(yǎng)成分為叁倍,而加水不變。
水源水大腸菌群檢索表
接種水量11.11mL,分別為10、1、0.1 和0.01mL各1份
接種水樣/mL | 每L水樣中大腸菌群數(shù) | |||
10 | 1 | 0.1 | 0.01 | |
- | - | - | - | <90 |
- | - | - | + | 90 |
- | - | + | - | 90 |
- | + | - | - | 95 |
- | - | + | + | 180 |
- | + | - | + | 190 |
- | + | + | - | 220 |
+ | - | - | - | 230 |
- | + | + | + | 280 |
+ | - | - | + | 920 |
+ | - | + | - | 940 |
+ | - | + | + | 1800 |
+ | + | - | - | 2300 |
+ | + | - | + | 9600 |
+ | + | + | - | 23800 |
+ | + | + | + | >23800 |
若接種水量為111.1mL則上述數(shù)字減少10倍,若接種水量為1.111mL則上述數(shù)字增加1