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技術(shù)文章

水質(zhì)微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

點(diǎn)擊次數(shù):1690 發(fā)布時(shí)間:2014-3-6

 

通過(guò)本試驗(yàn),了解食品檢驗(yàn)中水質(zhì)微生物檢測(cè)的基本方法。

 

一、水樣的采集

1.自來(lái)水

先將水用清潔布拭干,并用攝子夾消毒棉花沾酒精灼燒水3min滅菌,再打開(kāi)水使水流5min后,以滅菌的三角瓶或生理鹽水瓶接取水樣,以待檢測(cè)。

2.池水、河水或湖水

應(yīng)取距水面1015cm的深層水,先將滅菌的帶塞的玻璃瓶瓶口向下浸入水中,然后翻轉(zhuǎn)過(guò)來(lái),除去瓶塞,水即流入瓶中,盛滿后,將瓶塞塞好,再?gòu)乃腥〕觯⒓礄z驗(yàn),否則需放入冰箱保藏。

 

二、細(xì)菌菌落總數(shù)測(cè)定(SPC

1.樣品稀釋與制備

1自來(lái)水用滅菌吸管吸取1mL 水樣,注入滅菌的培養(yǎng)皿中,共做兩個(gè)平皿。然后倒入約15 mL已溶化并冷卻至45℃左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,并輕輕搖晃,使水樣與培養(yǎng)基充分混勻。待冷卻后倒置于36±1℃培養(yǎng)24h,進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

2池水、河水或湖水等用無(wú)菌吸管吸取檢測(cè)水樣1mL于*支9mL生理鹽水試管中,搖勻,再?gòu)牡?/span>1支稀釋試管中吸取1mL于第2支生理鹽水的試管中,如此類推,做成一系列的稀釋液。一般稀釋度可選擇10-1、10-2、10-310-4,若水樣混濁或污染嚴(yán)重的可再進(jìn)一步稀釋至適宜稀釋度。自zui后三個(gè)稀釋度的試管中各吸取1mL稀釋液于培養(yǎng)皿中,每稀釋度做二個(gè)平皿,傾注入約15mL 已溶化并冷卻至45℃左右的營(yíng)養(yǎng)瓊脂,并輕晃平皿,使之混勻,待冷卻后倒置于36±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h?!?/span>

 

2.菌落計(jì)數(shù)方法

待平皿培養(yǎng)24h長(zhǎng)出菌落后作平皿菌落計(jì)數(shù),可用肉眼觀察,必要時(shí)用放大鏡檢查,以防遺漏,在記下各皿的菌落數(shù)后,求出同稀釋度的2個(gè)平皿平均菌落數(shù)。

 

    3.菌落計(jì)數(shù)的報(bào)告:

    ①平皿菌落數(shù)的選擇:選取菌落數(shù)在30300之間的平皿作為菌落總數(shù)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn),一個(gè)稀釋度使用兩個(gè)平皿應(yīng)采用其平均數(shù),其中一個(gè)平皿有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí),則不宜采用,而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平皿作為該稀釋度的菌落數(shù),若片狀菌落不到平皿的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,則可計(jì)算半個(gè)平皿后乘2以代表全皿菌落數(shù)。

②稀釋度的選擇: 

a.應(yīng)選擇平均菌落數(shù)在30300之間的稀釋度,乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表例1)。

b.若有兩個(gè)稀釋度,其生長(zhǎng)之菌落數(shù)均在30300之間,則應(yīng)視二者之比如何來(lái)決定,若其比值小于2,應(yīng)報(bào)告其平均數(shù):若大于2則報(bào)告其中較小的數(shù)字(見(jiàn)表例23)

c.若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300,則應(yīng)按稀釋度zui高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表例4)

d.若所有釋稀度的平均菌落數(shù)均小于30,則應(yīng)按稀釋倍數(shù)zui低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表例5)。

e.若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30300之間,其中一部分大于300或小于30時(shí),則以zui接近30300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表例6)

    f.若所有稀釋度均無(wú)菌落生長(zhǎng),則以小于()1乘以zui低稀釋倍數(shù)報(bào)告之(見(jiàn)表例7)。

 

               細(xì)菌菌落總數(shù)計(jì)算方法(SPC法)

例次

不同稀釋度平均CFU

兩稀釋度

CFU之比

菌落總數(shù)報(bào)告

CFU/mL(g)

 

10-1

10-2

10-3

1

1356

164

20

164001.6X104

兩位以后的數(shù)字采用四舍五入的方法去舍。

2

2760

295

46

1.6

377503.8X104

3

2890

271

60

2.2

271002.7X104

4

3000

1650

513

5130005.1X105

5

27

11

5

2702.7X102

6

無(wú)法計(jì)數(shù)

305

12

305003.5X104

7

0

0

0

 

10

 

③菌落數(shù)的報(bào)告:菌落數(shù)小于10,按<10報(bào)告;在100以內(nèi)時(shí),按其實(shí)有數(shù)報(bào)告;大于100時(shí),采用二位有效數(shù)字,在二位有效數(shù)字后面的數(shù)值,以四舍五入方法計(jì)算,為了縮短數(shù)字后面的零數(shù),也可用10的指數(shù)來(lái)表示。

 

    三、大腸菌群檢驗(yàn):

    大腸菌群系指一群在36±124h能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣,需氧和兼性厭氧G-無(wú)芽孢桿菌,包括埃希氏大腸桿菌、克雷伯氏菌、陰溝腸桿菌和檸檬酸桿菌該菌群主要來(lái)源于人畜糞便,故以此作為糞便污染指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)水質(zhì)的衛(wèi)生質(zhì)量,具有廣泛的衛(wèi)生學(xué)意義。

水中大腸菌群數(shù)系以每1L水樣中大腸菌群zui近似數(shù)(M.P.N)個(gè)表示。

瓶裝水、飲用水、水源水和游泳池水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

水          源

大腸菌群 (個(gè)/L)

CFU/mL

瓶裝水(礦泉水、純凈水)

2

50

飲用(自來(lái))水

2

100

水源水

準(zhǔn)備加氯消毒后供飲用的水

1000

 

準(zhǔn)備凈化處理及加氯消毒后供飲用的水

10000

 

游泳池水

100

1000

  1. 生活飲用水或食品廠生產(chǎn)用水的檢驗(yàn)

1)初步發(fā)酵試驗(yàn)

2個(gè)各裝有50mL 叁倍濃縮的十二烷基硫酸鈉乳糖蛋白胨發(fā)酵管中,各加入100 mL水樣,將10支含有5mL叁倍乳糖蛋白胨發(fā)酵管中各加入10mL水樣,于36±1℃培養(yǎng)24h,24h未產(chǎn)氣者繼續(xù)培養(yǎng)至48h。若水質(zhì)條件變化不大的飲用水(或生產(chǎn)用水)可采用3個(gè)裝有50mL 叁倍濃縮的十二烷基硫酸鈉乳糖蛋白胨發(fā)酵管分別加入100mL 水樣。

  2)分離培養(yǎng)

將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別接種在伊紅美蘭瓊脂平板,置36±1℃培養(yǎng)1824h,然后取出,觀察菌落形態(tài),凡菌落或菌苔符合深紫黑色,有金屬光澤;紫黑色,不帶或略帶金屬光澤;淡紫紅色,中心顏色較深或紫紅色菌落特征的均應(yīng)進(jìn)一步作革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。

  3)證實(shí)試驗(yàn)

在上述平板上,挑取在此平板生長(zhǎng)符合上述特征的菌落,或可疑無(wú)法判斷的菌落12個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色,同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管,置36±1℃培養(yǎng)24±2h,觀察產(chǎn)氣情況,凡乳糖發(fā)酵管產(chǎn)氣,革蘭氏染色為陰性的無(wú)芽孢桿菌,即可報(bào)告為大腸菌群陽(yáng)性;如乳糖發(fā)酵管不產(chǎn)氣或革蘭氏染色陽(yáng)性,則報(bào)告為大腸菌群陰性。

4)根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù),查下列表。

 

飲用水大腸菌群檢索表(接種水樣總量300mL,其中100mL2份,10mL10份)

100mL水樣陽(yáng)性管數(shù)

10mL水樣陽(yáng)性管數(shù) 

    0

    1

    2

個(gè)/L

個(gè)/L

個(gè)/L

0

3

4

11

1

3

8

18

2

7

13

27

3

11

18

38

4

14

24

52

5

18

30

70

6

22

36

92

7

27

43

120

8

31

51

161

9

36

60

230

10

40

69

230

 

大腸菌群變異不大的飲用水檢索表

陽(yáng)性管數(shù)

0

1

2

3

接種水樣總量300mL 3100mL

1L水樣中大腸菌群數(shù)

3

4

11

18

 

2池水、河水或湖水等水源水的檢驗(yàn)

將水樣稀釋成10-110-2。分別吸取1mL 10-110-2的稀釋水樣和1mL原水樣,各注入裝有10mL單料乳糖蛋白胨發(fā)酵管中,另取10mL原水樣注入裝有5mL叁倍十二烷基硫酸鈉乳糖蛋白胨發(fā)酵管中(接種水量為11.11mL,若水源水嚴(yán)重污染則取樣量應(yīng)為1.111mL,即原水樣、10-1、10-2、10-3;若污染輕度水取樣為111.1mL,即100倍原水樣、10倍原水樣、原水樣和10-1)。置36±1℃培養(yǎng)24±2h,觀察產(chǎn)氣情況,若有產(chǎn)氣者則按上述的分離培養(yǎng)與證實(shí)試驗(yàn)進(jìn)行,zui后根據(jù)產(chǎn)氣管數(shù)查表報(bào)告。

 

四、培養(yǎng)基配方

1)生理鹽水    NaCl  9g      水 1000mL

2)伊紅美蘭培養(yǎng)基(EMB

蛋白胨水瓊脂培養(yǎng)基  100mL (蛋白胨 10g NaCl  5g  瓊脂20g       1000mL  pH7.6  12120min

  乳糖 2g  2%伊紅液 2mL  0.65%美蘭液 1mL 

將已滅菌的蛋白胨水瓊脂溶化,冷卻至60℃左右時(shí),按無(wú)菌操作加入乳糖、伊紅液和美蘭液(這三種應(yīng)分別在115℃滅菌20min),搖勻后倒平板。

3乳糖發(fā)酵液(供復(fù)發(fā)酵用)

  蛋白胨 10g  乳糖 5g  NaCl  5g   水 1000mL   pH7.4

  1. 營(yíng)養(yǎng)瓊脂

蛋白胨 10g  牛肉膏 3g  NaCl  5g  瓊脂 20g  水 1000mL   pH7.0-7.2  121℃ 20min。

5單料十二烷基硫酸鈉乳糖發(fā)酵液配方:

蛋白胨 10g   牛肉膏  3g   乳糖  5 g   NaCl   5g

1.6%溴甲酚紫乙醇液  1mL     十二烷基硫酸鈉 0.1g

  水  1000mL  pH7.27.4

將上述除指示劑外溶于水,調(diào)pH7.27.4,再加入指示劑。

6叁料十二烷基硫酸鈉乳糖發(fā)酵液配方

按單料十二烷基硫酸鈉乳糖發(fā)酵液配方要求各營(yíng)養(yǎng)成分為叁倍,而加水不變。

 

水源水大腸菌群檢索表

接種水量11.11mL,分別為10、1、0.1 0.01mL1

接種水樣/mL

L水樣中大腸菌群數(shù)

10

1

0.1

0.01

90

90

90

95

180

190

220

230

280

920

940

1800

2300

9600

23800

23800

若接種水量為111.1mL則上述數(shù)字減少10倍,若接種水量為1.111mL則上述數(shù)字增加1

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