高速逆流色譜儀的主要原理介紹

閱讀：1931發(fā)布時(shí)間：2022-8-16

高速逆流色譜法 (High-speed Countercurrent Chromatography，簡(jiǎn)稱HSCCC)，是一種連續(xù)高效的液液分配色譜技術(shù)，與其它色譜技術(shù)不同的是它不需任何固態(tài)載體，因此能避免固相載體表面與樣品發(fā)生反應(yīng)而導(dǎo)致樣品的污染、失活、變性和不可逆吸附等不良影響。同時(shí)它也具有適用范圍廣、快速、進(jìn)樣量大、費(fèi)用低、回收率高等優(yōu)點(diǎn)。因此，己在生物、醫(yī)藥、食品、材料、化妝品和環(huán)保等領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用，尤其是在天然產(chǎn)物活性成分的分離純化領(lǐng)域受重視。

應(yīng)用范圍廣，適應(yīng)性好。由于溶劑系統(tǒng)的組成與配比可以是無限多的，因而從理論上講HSCCC適用于任何極性范圍的樣品的分離，所以在分離天然化合物方面具有其獨(dú)到之處。并因不需固體載體，而消除了氣液色譜中由于使用載體而帶來的吸附現(xiàn)象，適用于分離極性物質(zhì)和其它具有生物活性的物質(zhì)。

原理

在對(duì)旋轉(zhuǎn)管的流體動(dòng)力平衡進(jìn)行研究時(shí)，偶然發(fā)現(xiàn)了高速逆流色譜法，其為建立于單向性流體動(dòng)力平衡體系之上的一種逆流色譜分離方法。當(dāng)使用緩慢的速度轉(zhuǎn)動(dòng)螺旋管時(shí)，螺旋管中的兩相由一端分布到另一端，將其中一相當(dāng)作移動(dòng)相，由一端往另一端洗脫時(shí)，在螺旋管里，另一相的保留值約為一半，然而隨著移動(dòng)相流速的增大，這一保留量會(huì)減小，從而降低了分離效率。然而加快螺旋管的轉(zhuǎn)速，會(huì)改變兩相的分布，當(dāng)轉(zhuǎn)速達(dá)到臨界范圍時(shí)，沿螺旋管長(zhǎng)度兩相就會(huì)*分開，其中首端的一段會(huì)由某一相全部占據(jù)，這一段被叫做首端相，尾端的一段由另一段全部占據(jù)，這一段被叫做尾端相。兩相的這種單向性分布特征正好為高速逆流色譜所利用。在高的螺旋管轉(zhuǎn)動(dòng)速下，若由首端相往尾相送入，其將穿過首端相往螺旋管的尾端移動(dòng)。當(dāng)分離時(shí)，先將其中的一相(固定相)注入到螺旋管內(nèi)，之后將移動(dòng)相由合適的一端泵入，使其載著樣品在螺旋管中無限次的分配。固定相隨著儀器的轉(zhuǎn)速越快，保留的越多，也就會(huì)有越好的分離效果，并且使分離速度得到大大地提高，所以叫做高速逆流色譜。

應(yīng)用領(lǐng)域：

（1）天然產(chǎn)物已知有效成分的分離純化

（2）化學(xué)合成物質(zhì)的分離純化

（3）中藥指紋圖譜和質(zhì)量控制研究

（4）抗生素的分離純化

（5）天然產(chǎn)物未知有效成分的分離純化（新化合物開發(fā)）

（6）海洋生物活性成分的分離純化

（7）放射性同位素分離

（8）多肽和蛋白質(zhì)等生物大分子分離以及手性分離等。

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