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Postnova場(chǎng)流分離系統(tǒng)應(yīng)用舉例——蛋白質(zhì)聚集體分離的理想解決方案

時(shí)間:2010-11-1閱讀:833
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Postnova場(chǎng)流分離系統(tǒng)應(yīng)用舉例——蛋白質(zhì)聚集體分離的理想解決方案

 

     蛋白質(zhì)聚集體已經(jīng)成為藥學(xué)發(fā)展和質(zhì)檢上一個(gè)重要的問(wèn)題。其活性,生物利用度和可能的消極免疫響應(yīng)等性能直接與不同程度的聚集態(tài)的存在有關(guān)。因此不僅FDA, 更多的*和私人研究機(jī)構(gòu)都對(duì)聚集態(tài)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生越來(lái)越大的興趣。他們研究的目標(biāo)是確定的聚集情況,即藥物中的蛋白質(zhì)中某個(gè)時(shí)間有多少聚集態(tài)結(jié)構(gòu)形成以及如何避免這種情況。

 

場(chǎng)流分離技術(shù)是分離技術(shù)的一種,它可以與液相色譜(LC)相比。就像液相主要用來(lái)分離小分子一樣,場(chǎng)流分離主要用來(lái)分離大分子或粒子(可稱為:粒子色譜)。場(chǎng)流分離技術(shù)是一個(gè)*的分離技術(shù),所有場(chǎng)流分離技術(shù)都使用相同的基本分離的原則,但采用不同的分離場(chǎng)。根據(jù)不同分離場(chǎng),場(chǎng)流分離技術(shù)可分為流動(dòng)場(chǎng)流分離,沉淀場(chǎng)流分離,熱場(chǎng)流分離等。

當(dāng)樣品注射到場(chǎng)流分離通道時(shí),分離應(yīng)力作用于聚合物或粒子強(qiáng)迫它們向通道底層移動(dòng),通道底層就被稱為聚集壁。樣品不能透過(guò)聚集壁,所以它們?cè)俅螖U(kuò)散到通道中心。擴(kuò)散應(yīng)力被分離應(yīng)力抵消,在很短的時(shí)間(一般是30120秒)內(nèi)兩種力之間就建立起一個(gè)穩(wěn)定的動(dòng)態(tài)平衡。大小不同的顆粒有著不同的擴(kuò)散系數(shù),所以它們?cè)谕ǖ纼?nèi)由于速度梯度而被分離。注射后的粒子/聚合物由于“垂直場(chǎng)力”的存在,受迫向垂直于流動(dòng)相流動(dòng)的方向移動(dòng)。小粒子由于具有較大的擴(kuò)散系數(shù)將會(huì)比大粒子在通道內(nèi)擴(kuò)散的更深遠(yuǎn)。結(jié)果就是,小粒子在通道內(nèi)被“層流”更快的定位,并因此而被洗脫出來(lái);而大粒子則定位較慢,后洗脫出來(lái)。

上圖是使用AF4非對(duì)稱場(chǎng)流分離單克隆抗體的結(jié)果。在20分鐘內(nèi),不同程度的聚集態(tài)被分開,整個(gè)分離過(guò)程由于沒(méi)有固定相存在,因此蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)不會(huì)被破壞。樣品不需要前處理,更可以通過(guò)聯(lián)用多種在線檢測(cè)器(LS, UV, RI, SEM, DLS,方便迅速得到需要的數(shù)據(jù)。
 
場(chǎng)流分離技術(shù)具有以下優(yōu)點(diǎn):
      快速、溫和的分離,可以兼容任何溶劑和緩沖液
      超高的分辨率(±1nm)
      沒(méi)有任何固定相的分離通道
      寬分離范圍:粒徑1nm~100mm /分子量1000Da~1012Da
      無(wú)需前處理及過(guò)濾,直接進(jìn)樣復(fù)雜基質(zhì)樣品
      可收集所需要的樣品,方便升級(jí)至制備級(jí)
      能夠連接各種檢測(cè)器,如在線串聯(lián)紫外、光散射、熒光、質(zhì)譜等檢測(cè)器
      可同時(shí)測(cè)定分子的分子量及粒子的粒徑。

這些優(yōu)點(diǎn)使場(chǎng)流分離技術(shù)在蛋白質(zhì)及其聚集體分離方面可以發(fā)揮巨大的作用。

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