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本方案適用食品中牛乳鐵蛋白的測定。

(1)磷酸鹽緩沖液Ⅰ：稱取 30.08g十二水合磷酸氫二鈉，2.50g二水合磷酸二氫鈉，加入800mL去離子水溶解，再加入20mL乳鐵蛋白提取劑^*，用純水定容至1L，混勻。

(2) 磷酸鹽緩沖液Ⅱ：稱取15.04g十二水合磷酸氫二鈉，1.25g二水合磷酸二氫鈉，5.84g氯化鈉，加適量水溶解，定容至1L，混勻。

(3) 洗脫溶液：稱取7.1g十二水合磷酸氫二鈉，58.4g氯化鈉，用適量水溶解，并定容至1L。

*乳鐵蛋白提取劑隨貨(肝素免疫親和柱ProElut^® HP IAC)附贈，可有效增加提取效率和凈化效率。

稱取5g樣品到50mL離心管中，加入25mL磷酸鹽緩沖液Ⅰ，漩渦振蕩5min，然后在4℃，10000r/min條件下離心15min，去除上層奶脂用大量程移液器取出中間層10mL作為上樣液待凈化。

ProElut^® HP IAC 6mL 20/pk (Cat.#: 67117)

(1)活化：將10mL注射器連接于親和柱上端，放掉柱管保護(hù)液，取5mL磷酸鹽緩沖液Ⅱ活化親和柱；

(2)上樣：取提取樣液10mL過柱凈化(控制流速1-3mL/min)，棄去流出液；

(3)淋洗：溶液全部過柱后，加入10mL磷酸鹽緩沖溶液Ⅱ淋洗，甩干柱內(nèi)水分；

(4)洗脫：加入4mL洗脫溶液進(jìn)行洗脫并收集，洗脫液混勻過0.22μm水系濾膜，待液相色譜檢測。

色譜柱：Bio-Bond^® 5μm C4, 250x4.6mm (Cat.#: 84406)

流速：1.0mL/min

進(jìn)樣量：50μL

柱溫：30℃

檢測器：PDA 280nm

流動相：A:乙腈   B:0.1%三氟乙酸水溶液

梯度設(shè)置：

(1) 肝素親和柱隨貨附贈了乳鐵蛋白提取劑，有效增加了提取效率和凈化效率。

(2) 液體牛奶樣品在50mg/kg、100mg/kg、200mg/kg添加濃度水平上的回收率均大于85%，回收驗證合格。