哺乳動物穩(wěn)定轉染細胞系構建服務

諾百優(yōu)勢
質量保證：可對轉染細胞的外源基因表達進行嚴格鑒定，包括RNA水平和蛋白水平
篩選后可以得到穩(wěn)定表達外源基因的細胞克?。嘿|粒DNA整合到染色體上；可使用慢病毒載體轉導的實驗條件，理論上可以
確保每個細胞只有單拷貝插入。偏向于轉錄活躍區(qū)段，且整合后非常穩(wěn)定，在傳代100次后仍然保留在宿主基因組中，可以克
服使用非病毒載體轉染方法構建穩(wěn)定株，成功率低，穩(wěn)定性差，穩(wěn)定克隆株易出現(xiàn)不均一（含有非整合細胞）等缺點。
不同選擇：使用混合穩(wěn)定株或者獲得多個不同單克隆穩(wěn)定株

原理
通過脂質體介導轉染法及電穿孔等基因轉染技術，將靶基因被導入細胞后，一般在轉染后48小時，靶基因即在細胞內表達。如若建
立穩(wěn)定的細胞系，則可對靶細胞進行篩選，根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物，zui常用的直核表達基因載體的
標志物有潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin）。篩選后可以得到穩(wěn)定表達外源基因的細胞克隆，這就是穩(wěn)定轉染。穩(wěn)定
轉染的質粒DNA整合到染色體上，使得轉染的細胞可*表達。哺乳動物細胞表達系統(tǒng)的優(yōu)勢在于能夠指導蛋白質的正確折疊，提
供多種翻譯后加工功能，因而表達產物在分子結構、理化特性和生物學功能方面zui接近于天然的高等生物蛋白質分子。

服務流程
1） 客戶提供：構建好的外源基因載體；待轉染的細胞系（1E6個細胞，
可傳代，倍增時間小于48小時）；關于細胞培養(yǎng)條件的說明
2） 篩選濃度測定：以10 - 14天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度
3） 細胞接種：轉染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據各種
細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉染當天細胞應達到60% - 80%
覆蓋
4） 細胞轉染；抗生素篩選；鑒定篩選結果
5） 我們提供：構建好的穩(wěn)定細胞系及相關的外源基因表達分析