胰蛋白酶ELISA檢測試劑盒(新篩)

【前言簡介】

胰蛋白酶最初是由外分泌胰腺的腺泡細(xì)胞合成并分泌的，是胰蛋白酶原的前體或原酶（分子量-24,000）。已經(jīng)認(rèn)識到兩種不同的胰蛋白酶原同工酶。兩種形式都通過十二指腸腸激酶的作用轉(zhuǎn)化為具有酶活性的胰蛋白酶。在存在CA ++離子的情況下，這種腸激酶可以從胰蛋白酶原中去除六肽Val-（Asp）4 -Lys，從而釋放出胰蛋白酶的活性形式。

血液中出現(xiàn)三種特定的胰蛋白酶“酶活性”抑制劑：α1-抗胰蛋白酶，α2-宏球蛋白和α-胰蛋白酶間抑制劑。由于內(nèi)源性因子與所使用的特定胰蛋白酶抗體之間存在競爭性和可變性的血清胰蛋白酶抑制作用，并且由于某些胰蛋白酶原未進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，因此新生兒胰蛋白酶ELISA與先前報(bào)道的測定方法一致，即將其測定的物種描述為“總免疫反應(yīng)性胰蛋白酶”類似活動”或IRT。

作為樣品，該測定利用一個(gè)3mm的打孔濾紙盤。該測定包括過夜孵育和1.25小時(shí)孵育。使用圓盤打孔，移液和洗板設(shè)備可以大大自動化該測定。

每個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須確定正常范圍，并與所使用的免疫試劑一致。由于不同測定系統(tǒng)之間的校準(zhǔn)值不同，因此目前很難達(dá)到通用的正常范圍。

【檢測原理】

胰蛋白酶ELISA檢測試劑盒(新篩)采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）技術(shù)對血斑樣品中的人胰蛋白酶進(jìn)行定量。在ELISA分析中，針對同一抗原的不同部分產(chǎn)生了兩種互補(bǔ)的抗體構(gòu)型。在ELISA中，一種抗體系統(tǒng)與微孔板結(jié)合，另一種抗體用酶標(biāo)記。當(dāng)存在抗原時(shí)，它同時(shí)以“橋”或“三明治”方式結(jié)合兩種抗體。整個(gè)復(fù)合體仍然與孔相連。洗掉“未結(jié)合”的酶后，添加特定的底物并將其轉(zhuǎn)化為有色的終產(chǎn)物，并用終止溶液迅速終止反應(yīng)。

讀取每個(gè)孔在450 nm處的吸光度，并將結(jié)果繪制為以ng / mL為單位的IRT濃度與方格紙上的吸光度的關(guān)系。

在此過程中，從在Schleicher和Schuell的＃903濾紙上收集的血跡打孔一張圓盤。將該盤與洗脫緩沖液一起放入抗體孔中。過夜孵育后，吸出洗脫緩沖液和血點(diǎn)，洗滌孔，并添加酶標(biāo)記的抗體。第二次孵育后，將孔洗滌，并將底物添加到孔中。用終止溶液迅速終止酶反應(yīng)，并讀取吸光度。然后構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，從中可以計(jì)算出未知濃度的胰蛋白酶。

兔抗IRT抗體

最重要的是，IRT ELISA利用IRT抗體，它具有針對IRT的“分子形式”特異性。（23-27）

自從抗IRT的多克隆抗體的最初發(fā)展以來，我們已就該抗體與“病理”形式的IRT相對于正常循環(huán)形式增強(qiáng)的反應(yīng)性報(bào)道了抗體。這種“病理學(xué)特異性”與所用標(biāo)準(zhǔn)品絕對值的定量差異無關(guān)，并且是抗體的功能。對該抗體進(jìn)行廣泛分析的結(jié)果表明，就其分子種類或相互作用而言，“病理IRT”比純化的完整胰蛋白酶對我們的抗體表現(xiàn)出更大的“效力”。

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