20121ES60 NP-40 Lysis Buffer NP-40裂解液
參考價(jià) | ¥228.00 |
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌Yeasen/翌圣生物
- 型號(hào)20121ES60
- 所在地上海市
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間2024/9/22 10:32:50
- 訪問次數(shù) 150
100 mL | 228.00元 | 999 件可售 |
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一種比較溫和的細(xì)胞組織裂解液。含有sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多種抑制劑,可以有效抑制蛋白降解。NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation,IP)、免疫共沉淀(Co-IP)和ELISA等實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品信息
貨號(hào) | 20121ES60 |
規(guī)格 | 100 mL |
儲(chǔ)存條件
-25~-15℃保存,有效期1年。盡量避免反復(fù)凍融,建議分裝后使用。
使用說明
(一) 細(xì)胞樣品
1. 融解NP-40裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的最終濃度為1 mM。
2. 貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液清洗細(xì)胞一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸動(dòng)物細(xì)胞1-2秒后,細(xì)胞就會(huì)被裂解。植物細(xì)胞宜在冰上裂解2-10分鐘。
懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成5×105-1×106個(gè)細(xì)胞/管,然后再裂解。因?yàn)榇髨F(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分,而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸,相對(duì)比較容易裂解充分。
充分裂解后,10000-14000 g離心3-5分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量說明:通常6孔板每孔細(xì)胞加入150 μL裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200 μL 或250 μL。每100萬動(dòng)物細(xì)胞用100 μL本產(chǎn)品裂解后獲得的上清,其蛋白濃度約為2-4 mg/ml,不同細(xì)胞有所不同。
(二)組織樣品:
1. 把 切成細(xì)小的碎片。
2. 融解NP-40裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的最終濃度為1 mM。
3. 按照每20 mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000 g離心3-5分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得充分。
注意事項(xiàng)
需自備PMSF(Cat#20104ES),裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
用NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定其蛋白濃度(Cat#20201ES/20200ES)。 由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測(cè)定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
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本產(chǎn)品僅作科研用途。
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。