2-8℃ 避光

開(kāi)蓋后組份按要求條件保存。

6個(gè)月

微孔板，酶標(biāo)儀

血清血漿/尿液/組織/細(xì)胞

微孔板，酶標(biāo)儀

1.分光光度計(jì)
2.恒溫水浴鍋
3.漩渦混勻器
4.移液器

1.純水
2.蛋白定量試劑盒

1.微孔板
2.吸頭
3.離心管

1.試劑D打開(kāi)后裝在空的小塑料瓶?jī)?nèi)（附空瓶一只）；
2.試劑E 天冷時(shí)會(huì)有沉淀或混濁，需在37℃水浴加熱至透明后即可使用。

試劑配制
1. 試劑A標(biāo)準(zhǔn)品工作液的配制：
取試劑A標(biāo)準(zhǔn)品一支加試劑F：生理鹽水10ml混勻，即得1umol/ml標(biāo)準(zhǔn)品工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配；
2. 底物緩沖液的配制：
使用前每支試劑B粉劑加試劑F：生理鹽水20ml，制備成底物緩沖液；2-8℃可保存2周。
3. 顯色工作液的配制：
使用前將試劑C：試劑F生理鹽水=1:9稀釋，制備成顯色工作液；現(xiàn)用現(xiàn)配，也可一次配制30ml，避光2-8℃可保存3個(gè)月。

操作步驟：
(一)、樣本前處理
組織樣本：
準(zhǔn)確稱取組織重量，按重量（g）：體積（ml）=1:9的比例，加入9倍體積的生理鹽水，冰水浴條件下機(jī)械勻漿，2500g，離心10min，取上清待測(cè)（同時(shí)取部分上清測(cè)定蛋白濃度）；

血清（漿）：
取不抗凝或抗凝全血1000~1500g，離心8min，取上層血清（漿）。一般測(cè)定時(shí)用生理鹽水按1:9比例將血清（漿）稀釋（具體稀釋濃度以預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果為準(zhǔn)）；

全血樣本：
取0.1ml抗凝全血加純水至10ml，即按1:99稀釋，充分混勻；
【注】：
? 如果樣本量很少，可以減少取樣量；每個(gè)樣本取樣前必須充分混勻；
（三）、計(jì)算公式：
A、 組織勻漿中乙酰酯酶的計(jì)算：
1. 單位定義：
每毫克組織蛋白在37℃保溫6min，水解反應(yīng)體系中1umol 基質(zhì)為1個(gè)活力單位；

2. 計(jì)算公式：
組織勻漿中酶活力 = 測(cè)定OD值 – 對(duì)照OD值 X 標(biāo)準(zhǔn)品濃度 ÷待測(cè)樣本蛋白濃度
（U/mgprot） 標(biāo)準(zhǔn)OD值 - 空白OD值 （1umol/ml） （mgprot/ml）

B、血清(漿)中乙酰酯酶的計(jì)算：
1. 單位定義：
每毫升血清樣本在37℃保溫6min，水解反應(yīng)體系中1umol 基質(zhì)為1個(gè)活力單位；

2. 計(jì)算公式：
血清（漿）中酶活力 = 測(cè)定OD值 – 對(duì)照OD值 X 標(biāo)準(zhǔn)品濃度 X待測(cè)樣本測(cè)試前
（U/ml） 標(biāo)準(zhǔn)OD值 - 空白OD值 （1umol/ml） 稀釋倍數(shù)


C、全血中乙酰酯酶的計(jì)算：
1. 單位定義：
每毫升全血在37℃保溫6min，水解反應(yīng)體系中1umol 基質(zhì)為1個(gè)活力單位；

2. 計(jì)算公式：

全血中酶活力 = 測(cè)定OD值 – 對(duì)照OD值 X 標(biāo)準(zhǔn)品濃度 X待測(cè)樣本測(cè)試前
（U/ml） 標(biāo)準(zhǔn)OD值 - 空白OD值 （1umol/ml） 稀釋倍數(shù)